荧光免疫层析技术定量检测蓖麻毒素

摘要

为了建立免疫层析技术定量检测蓖麻毒素试剂,首先依据蓖麻毒素对半乳糖的特异性结合能力,采用亲和层析技术对蓖麻种子进行亲和层析纯化;其次采用凝胶过滤层析技术,获得更纯的天然蓖麻毒素纯品;最后以天然的蓖麻毒素脱毒为免疫原,分别免疫获得鼠抗相思中毒素单克隆抗体和兔抗蓖麻毒素多克隆抗体,利用获得的鼠抗蓖麻毒素单克隆抗体作为标记抗体,标记羧基荧光微球(激发波长365 nm,发射波长610 nm)在NC膜上包被兔抗蓖麻毒素多克隆体作为检测线、包被羊抗鼠IgG抗体作为质控线,建立蓖麻毒素双抗体夹心定量检测试剂,并对该试剂进行性能评价.结果显示,纯化后的蛋白经SDS-PAGE处理后,分为分子量为65 kDa左右的单条带、分子量为31 kDa左右的双条带和33 kDa左右的双条带,分别为Ricin毒素A链和B链.用TotalLab2.0软件分析纯化率为96％;检测试剂配合荧光免疫检测仪在0～50 ng/mL的检测范围时,拟合曲线R 2>0.990,线性范围为1～10 ng/mL,R 2>0.990,最低检出限为1 ng/mL,且批间、批内重复性均小于15％.此法特异性良好,常温稳定性14个月,样本检测能力良好,可在食品和环境中应用蓖麻毒素进行定量检测.