蓖麻毒素

摘要： 构建了一种新型的基于动力学竞争的适配体传感策略,通过无酶催化发夹自组装(CHA)反应进行信号放大和输出,实现了蓖麻毒素A链(RTA)的选择性灵敏检测.阻碍链(Blocker)能够分别与适配体(RA80)和发夹探针(HP1)竞争结合,而优先与RA80结合的RTA会影响RA80和HP1对Blocker的竞争反应,使更多的Blocker与HP1杂交.随后,与HP1结合的Blocker可通过HP1上修饰的生物素与磁珠表面链霉亲和素的共价键和作用,经过磁性作用分离出来,继而作为CHA的催化链,催化CHA产生荧光信号.随着RTA浓度增大,分离出的CHA催化链浓度增加,荧光信号增强,基于此可以建立输出荧光信号与RTA浓度的关系.为降低背景信号,在CHA中引入错配碱基对,通过减少呼吸作用或自身变构引起的非催化反应,有效改善了检测信号.本传感器对RTA的检出限为0.88 nmol/L,与文献报道的对蓖麻毒素的检出限相当,在食品(包括蔗糖、小苏打和面粉等)中RTA的回收率为91.2％ ～107.9％.本检测方法拓展了适配体识别机制,有效解决了基于平衡的传统互补链替换法中针对长链适配体设计阻碍链的难题,竞争元素设计简便,不需要冗长的平衡过程和适配体的修饰,为序列冗长、结构复杂的RNA适配体的应用奠定了基础.

摘要： 目的 利用时间分辨荧光技术建立一种可快速、准确地对蓖麻毒素、A型肉毒毒素及产气荚膜梭菌ε毒素进行定量检测的方法.方法 首先合成了一种可见光激发的镧系荧光微球,通过比较不同粒径的铕离子荧光微球,筛选出最佳粒径的微球偶联标记效价最高的捕获抗体,分别与相应检测抗体平行组合,确定最优的配伍组合条件建立检测方法.其次,对该法的敏感性、精密性、定量能力和特异性进行评价.结果 所建立的时间分辨荧光免疫层析法(TRFIC)可在20 min内完成对3种生物毒素的定性/定量检测.3种毒素的最低检出限均可达0.5 ng/ml,定量范围为0.5～50 ng/ml,3种毒素间及与黄曲霉毒素B1、T-2毒素均无交叉反应,批内重复性和批间重复性变异系数均小于15％.结论 该研究建立了一种基于可见光激发的TRFIC,在生物毒素的检测中获得了较高的最低检测限,与配套的小型便携式检测仪器一起使用,具有检测快速、可远程传输结果的优势,未来在生物反恐、生物武器核查等领域具有较高的应用价值和应用前景.

摘要： 目的利用时间分辨荧光技术建立一种可快速、准确地对蓖麻毒素、A型肉毒毒素及产气荚膜梭菌ε毒素进行定量检测的方法。方法首先合成了一种可见光激发的镧系荧光微球,通过比较不同粒径的铕离子荧光微球,筛选出最佳粒径的微球偶联标记效价最高的捕获抗体,分别与相应检测抗体平行组合,确定最优的配伍组合条件建立检测方法。其次,对该法的敏感性、精密性、定量能力和特异性进行评价。结果所建立的时间分辨荧光免疫层析法(TRFIC)可在20 min内完成对3种生物毒素的定性/定量检测。3种毒素的最低检出限均可达0.5 ng/ml,定量范围为0.5~50 ng/ml,3种毒素间及与黄曲霉毒素B_(1)、T-2毒素均无交叉反应,批内重复性和批间重复性变异系数均小于15%。结论该研究建立了一种基于可见光激发的TRFIC,在生物毒素的检测中获得了较高的最低检测限,与配套的小型便携式检测仪器一起使用,具有检测快速、可远程传输结果的优势,未来在生物反恐、生物武器核查等领域具有较高的应用价值和应用前景。

摘要： 目的探索中性粒细胞在蓖麻毒素肺中毒小鼠炎症发展过程中对下游炎症因子的影响。方法首先基于C57小鼠采用抗Gr-1抗体构建耗竭中性粒细胞的小鼠模型,以2×LD_(50)蓖麻毒素液体气溶胶以肺递送方式对小鼠攻毒后,采用流式细胞术和肺脏组织免疫组化验证中性粒细胞耗竭效果。评价肺脏组织病理变化以及肺泡灌洗液中促炎因子和趋化因子浓度变化,从而分析中性粒细胞发挥的作用。结果流式细胞术及肺脏组织免疫组化结果显示,耗竭中性粒细胞的小鼠模型构建成功。蓖麻毒素攻毒后,与对照组小鼠相比,耗竭中性粒细胞小鼠肺脏未显示明显组织病理变化,血管周围肺水肿程度无明显差异,但肺泡灌洗液中IL-1β、IL-13、IL-17A、IL-22、IL-23、IL-1α和ENA-78促炎因子表达上调,GRO-α、MCP-1、G-CSF和M-CSF趋化因子表达上调,抑炎因子IL-10表达上调,趋化因子MIP-1β表达下调。结论与对照组小鼠相比,耗竭中性粒细胞小鼠多种促炎和趋化因子代偿性升高,提示中性粒细胞在蓖麻毒素气溶胶肺中毒后的炎症平衡中具有重要作用,可能抑制了炎症的过度发展。

摘要： 建立了一种基于新型RNA底物脱嘌呤的蓖麻毒素(Ricin)体外活性检测方法,解决了传统Ricin体外脱嘌呤活性检测方法中底物易发生自水解而产生假阳性结果的问题.比较了Ricin脱嘌呤体外活性检测中普遍使用的单链DNA及相同序列RNA底物的活性差异,证实了RNA比DNA更适于作为Ricin脱嘌呤反应底物.对脱嘌呤反应条件进行优化,发现pH值、温度和RNA底物浓度是影响脱嘌呤反应效率的关键因素,在优化条件下,阴性对照样品中无腺嘌呤干扰.进一步对系列RNA底物进行系统筛选,总结了RNA茎-环结构组成与底物活性的规律,筛选得到了一种用于Ricin体外脱嘌呤活性检测的新型RNA底物,其活性是已报道最优底物的2倍.最终,基于筛选出的新型RNA底物,结合免疫磁珠特异性亲和方法,建立了复杂基质中活性Ricin的同位素标记腺嘌呤内标-液相色谱-三重四极杆质谱多反应监测模式定量检测方法.本方法专属性好,Ricin体外脱嘌呤活性检测的线性范围为5.0～300 ng/mL,检出限为1.0 ng/mL(S/N=3).将本方法应用于自来水、牛奶和血浆样品中活性Ricin的定量检测,加标回收率在91.0％ ～116.5％之间,相对标准偏差在3.2％ ～9.3％之间.本研究为食品安全以及化学武器核查等领域中活性Ricin的筛查鉴定提供了有效方法.

摘要： 目的 探索中性粒细胞在蓖麻毒素肺中毒小鼠炎症发展过程中对下游炎症因子的影响.方法 首先基于C57小鼠采用抗Gr?1抗体构建耗竭中性粒细胞的小鼠模型,以2×LD50蓖麻毒素液体气溶胶以肺递送方式对小鼠攻毒后,采用流式细胞术和肺脏组织免疫组化验证中性粒细胞耗竭效果.评价肺脏组织病理变化以及肺泡灌洗液中促炎因子和趋化因子浓度变化,从而分析中性粒细胞发挥的作用.结果 流式细胞术及肺脏组织免疫组化结果显示,耗竭中性粒细胞的小鼠模型构建成功.蓖麻毒素攻毒后,与对照组小鼠相比,耗竭中性粒细胞小鼠肺脏未显示明显组织病理变化,血管周围肺水肿程度无明显差异,但肺泡灌洗液中IL?1β、IL?13、IL?17A、IL?22、IL?23、IL?1α和ENA?78促炎因子表达上调,GRO?α、MCP?1、G?CSF和M?CSF趋化因子表达上调,抑炎因子IL?10表达上调,趋化因子MIP?1β表达下调.结论 与对照组小鼠相比,耗竭中性粒细胞小鼠多种促炎和趋化因子代偿性升高,提示中性粒细胞在蓖麻毒素气溶胶肺中毒后的炎症平衡中具有重要作用,可能抑制了炎症的过度发展.

摘要： 目的 构建稳定敲除小鼠Slc35c1基因的单克隆细胞株,为研究Slc35c1基因抗蓖麻毒素毒性效应奠定实验基础.方法 根据Slc35c1基因序列设计2对sgRNA插入载体lentiCRISPRv2中,构建lentiCRISPRv2-sgRNA质粒;慢病毒包装并感染NIH/3T3细胞,加入嘌呤霉素筛选阳性细胞;T7E1酶切鉴定sgRNA切割效率;利用有限稀释法筛选单克隆细胞并进行RT-qPCR检测及基因组PCR产物测序,确认Slc35c1敲除成功的细胞株;最后通过CCK-8试剂检测蓖麻毒素对野生型和Slc35c1敲除细胞对的抗毒效应差异.结果 测序结果显示sgRNA成功插入载体质粒中,T7E1酶切结果表明两对sgRNA均可高效切割基因组DNA.RT-qPCR及基因组PCR产物测序鉴定出Slc35c1敲除的纯合子细胞株.CCK-8实验结果显示,与野生型细胞相比,敲除Slc35c1使毒素作用NIH/3T3细胞24 h的IC50值由0.45×10-10 mol/L升至2.1×10-10 mol/L.结论 利用CRISPR/Cas9系统靶向敲除了NIH/3T3细胞中的Slc35c1基因并筛选获得纯合子细胞株,该细胞株可用于抗蓖麻毒素效应的研究.

摘要： 目的基于胶体金侧流层析技术,利用寡核苷酸序列为识别探针,建立裸眼半定量检测蓖麻毒素的方法。方法利用修饰生物素和FAM的寡核苷酸序列为识别探针,与标记FAM抗体的胶体金颗粒结合;在硝酸纤维素膜上包被链霉亲和素作为检测线,包被抗FAM抗体的二抗作为控制线,建立蓖麻毒素裸眼检测方法,评价其特异性和重复性,并利用image J软件进行数据处理分析,绘制检测曲线。结果胶体金侧流层析试纸条在120 min内完成检测,最低可检测到10 ng/mL,特异性、重复性良好。结论建立了检测蓖麻毒素的胶体金侧流层析方法,该方法无需制备相应抗体,且操作简单,可满足现场检测的需求。

摘要： 建立了一种基于生物条形码结合杂交链式反应扩增的高灵敏、特异性检测蓖麻毒素(Ricin toxin,RT)的方法.使用RT多克隆抗体(pAb)及条形码DNA(Barcode DNA)制备功能性金纳米探针(GNPs),通过与RT单克隆抗体(mAb)共同识别作用,形成"mAb-RT-pAb/AuNPs/Barcode DNA"三明治夹心结构,进一步利用条形码DNA作为引发链触发生物素标记的发卡探针进行杂交链式扩增,形成一条具有重复单元的长双链DNA.当使用辣根过氧化物酶标记链霉亲和素与长链DNA上的生物素结合后,通过鲁米诺与过氧化氢的化学发光底物发光进行测定.结果表明,本方法检测RT的线性范围为0.61 ng/mL～5.00μg/mL,检出限为0.52 ng/mL(S/N=3),本方法具有较宽的检测范围及较低的检出限,测定饮用水及脱脂牛奶样品中RT的加标回收率在83.4％ ～112.4％之间,相对标准偏差在2.2％ ～5.4％之间,表明本方法实用性良好,在食品和饮用水安全控制及防范生物恐怖袭击方面具有良好的应用前景.

摘要： 为了建立免疫层析技术定量检测蓖麻毒素试剂,首先依据蓖麻毒素对半乳糖的特异性结合能力,采用亲和层析技术对蓖麻种子进行亲和层析纯化;其次采用凝胶过滤层析技术,获得更纯的天然蓖麻毒素纯品;最后以天然的蓖麻毒素脱毒为免疫原,分别免疫获得鼠抗相思中毒素单克隆抗体和兔抗蓖麻毒素多克隆抗体,利用获得的鼠抗蓖麻毒素单克隆抗体作为标记抗体,标记羧基荧光微球(激发波长365 nm,发射波长610 nm)在NC膜上包被兔抗蓖麻毒素多克隆体作为检测线、包被羊抗鼠IgG抗体作为质控线,建立蓖麻毒素双抗体夹心定量检测试剂,并对该试剂进行性能评价.结果显示,纯化后的蛋白经SDS-PAGE处理后,分为分子量为65 kDa左右的单条带、分子量为31 kDa左右的双条带和33 kDa左右的双条带,分别为Ricin毒素A链和B链.用TotalLab2.0软件分析纯化率为96％;检测试剂配合荧光免疫检测仪在0～50 ng/mL的检测范围时,拟合曲线R 2>0.990,线性范围为1～10 ng/mL,R 2>0.990,最低检出限为1 ng/mL,且批间、批内重复性均小于15％.此法特异性良好,常温稳定性14个月,样本检测能力良好,可在食品和环境中应用蓖麻毒素进行定量检测.

摘要： 蓖麻毒素(Ricin)是一种从天然植物蓖麻籽中提取出来的一种糖基化Ⅱ型核糖体失活蛋白(RIPⅡ).能够专一性作用于细胞核糖体60S大亚基的28S核糖体核苷酸(rRNA),不可逆地水解一个含GAGA序列的保守腺苷酸的N-C糖苷键,释放一个腺嘌呤碱基使核糖体失活,抑制蛋白质的生物合成,使细胞死亡.本文建立了一种基于质谱技术的土壤基质中活性蓖麻毒素的检测方法。

摘要： 蓖麻毒素是迄今为止天然毒物中毒性最强的植物蛋白,一个毒素分子进入细胞内.就足以使整个细胞的蛋白质合成完全停止而死亡。蓖麻毒素的毒性是由其所特有的结构决定的，它由A，B两条链构成.A链是活性链，具有N-糖苷酶活性，可作用于真核细胞核糖体60S大亚基28S rRNA，水解A4324位腺嘌吟N-糖苷键，使其脱去腺嘌吟，丧失RNase的抗性而被降解.不能与EF-2结合.从而阻遏核糖体、EF-2、GTP复合体的形成，导致蛋白质的合成受到抑制，引发细胞死亡.B链具有凝集活性，能够识别和结合细胞表面含有半乳糖结构的受体，协助A链进入细胞.到目前为止，国际和国内很多实验室对蓖麻毒素的研究主要集中在凋亡，转运和检测这三方面，就蓖麻毒素诱导细胞凋亡而言.其形态学全面检测的文献不多.因此，我们系统性的研究了蓖麻毒素诱导细胞过程中的Hela细胞的生化学特征的和形态学的改变。

摘要： 自美国“9·11”恐怖袭击和炭疽芽孢事件发生之后，世界各国开始高度关注生物恐怖袭击。蓖麻毒素(Ricin，RCA60)是国际禁止化学武器公约附表中仅列出的两种生物毒素之一，被美国等国列为最有可能被用作恐怖袭击的生物战剂。RCA60自蓖麻籽中提取而来(占其重量的1％～3％)，属于Ⅱ型核糖体失活蛋白，由有糖苷酶活性的A链和有凝集素活性的B链组成。

摘要： 蓖麻毒素(Ricin)是从蓖麻籽中提取的植物糖蛋白,蓖麻毒素具有强烈的细胞毒性。本实验利用生物条形码检测方法对蓖麻毒素进行检测,检测结果显示检测灵敏度可达10fg/mL,是常规ELISA方法的10倍,本研究为发展高灵敏度的蓖麻毒素生物条形码检测试剂盒鉴定了基础。

摘要： 蓖麻毒素(ricin)是从蓖麻籽中提取出来的剧毒蛋白.它是由有糖苷酶活性的A链和有凝集素活性的B链组成,毒性机理是抑制蛋白质合成.其剧毒性易被恐怖组织所利用,特别是2003年多名恐怖分子携其惊现英国首都伦敦后,ricin这种致命的、毒性极强的生物毒素,已超过肉毒毒素、天花病毒等,被美国等国列为最有可能被用作恐怖袭击的生物战剂,是禁止化学武器公约组织所列清单化合物中仅有的两种生物毒素之一.因此研究具有高选择性、高灵敏度的ricin分析检测方法极为重要.

摘要： 本文研究了利用自行研制开发的SPR-2000表面等离子体谐振生化分析仪检测蓖麻毒素与其单克隆抗体IgG的免疫吸附反应,并研究了与用SPR技术检测生物大分子相互识别反应相关的一些问题.SPR-2000生化分析仪能检测到的蓖麻毒素最低浓度是200ug/ml.

摘要： 蓖麻毒素是蛋白质抑制,同时也能诱导细胞凋亡、细胞因子的产生和脂质过氧化等作用.为进一步了解蓖麻毒素作用的分子机制,采用westerm blot等方法检测蓖麻毒素及其糖链对肝癌细胞内的蛋白酪氨酸激酶的磷酸化作用以及SAPK/JNK信号途径的影响.结果表明:单独的A、B链均没有明显诱导细胞活化的作用,而只有蓖麻毒素A链通过B链结合于细胞膜的作用进入细胞后,通过破坏28S rRNA的结构,继而启动SAPK/JNK的激活途径.可能这是导致蓖麻毒素多种毒作用的主要原因.

摘要： 蓖麻毒素是从大戟科植物蓖麻籽中提取的一种毒蛋白.本文就其结构、毒性作用机理、纯化方法及其在肿瘤导向治疗和生物杀虫方面的应用作一简述.

摘要： 非寄主植物蓖麻含有对有害昆虫具有显著诱杀效果的蓖麻毒素,但是金龟甲不以蓖麻为寄主植物却对其表现出比寄主植物更加显著的选择偏好.金龟甲治理方面以应用为目的的引诱剂筛选多,趋向寄主或回避非寄主的反应过程较少.本文分别对金龟甲对寄主植物的选择研究、蓖麻挥发物和蓖麻毒素在植物保护中的应用,以及金龟甲与非寄主植物蓖麻之间的关系现有研究等方面进行综述,提出了蓖麻模拟金龟甲信息素引诱金龟甲,"无天敌空间"和模拟受害后寄主植物信息物质造成聚集等三方面猜想.为研究金龟甲对非寄主蓖麻的选择机制和发展金龟甲行为调控技术提供一定的理论依据.

摘要： 蓖麻饼因含有少量毒素,目前只能作肥料.本研究首先制备毒素,并进行毒素检测,然后对去毒方法进行了研究,最后用动物试验验证去毒饼粕饲料的安全性.

摘要： 本发明涉及一种乙醇溶液浸提蓖麻油同步浸除蓖麻饼粕中蓖麻碱、变应原的方法，其浸提蓖麻油效率及脱除蓖麻碱、变应原的效果如下：蓖麻油提取率≥99.01％，饼粕残油率≤1.58％，蓖麻碱脱除率≥96.05，变应原脱除率≥96.94％。本发明方法首先用高浓度的乙醇溶液浸提蓖麻油并浸除饼粕中蓖麻碱，后用低浓度的乙醇溶液继续浸除饼粕中蓖麻碱、变应原。整套工艺将蓖麻油浸提和饼粕中蓖麻碱、变应原的浸除结合了起来，实现了工艺的连续化，降低了工业成本，将乙醇作为浸提剂，实现了清洁化生产，不产生三废，有利于环境的保护，实现了蓖麻籽的综合利用，提高了蓖麻籽副产物的附加值，具有良好的应用价值。

摘要： 本发明涉及一种乙醇溶液浸提蓖麻油同步浸除蓖麻饼粕中蓖麻碱、变应原的方法，其浸提蓖麻油效率及脱除蓖麻碱、变应原的效果如下：蓖麻油提取率≥99.01％，饼粕残油率≤1.58％，蓖麻碱脱除率≥96.05，变应原脱除率≥96.94％。本发明方法首先用高浓度的乙醇溶液浸提蓖麻油并浸除饼粕中蓖麻碱，后用低浓度的乙醇溶液继续浸除饼粕中蓖麻碱、变应原。整套工艺将蓖麻油浸提和饼粕中蓖麻碱、变应原的浸除结合了起来，实现了工艺的连续化，降低了工业成本，将乙醇作为浸提剂，实现了清洁化生产，不产生三废，有利于环境的保护，实现了蓖麻籽的综合利用，提高了蓖麻籽副产物的附加值，具有良好的应用价值。

摘要： 本发明属于蛋白毒素检测领域，涉及一种基于冷冻构建金纳米探针的相对DNA步行器引发指数扩增检测蓖麻毒素的方法及试剂盒。本发明的方法主要有4个过程：冷冻构建金纳米探针，蓖麻毒素和金纳米探针竞争结合适配体，相对DNA步行器和指数扩增反应。本发明的方法和试剂盒可以在实际应用中以较高的灵敏度，良好的特异性和优异的稳定性检测蓖麻毒素。

摘要： 本发明提供了一种蓖麻毒素B链的检测试剂盒及其制备方法和蓖麻毒素B链的检测方法，属于生物免疫传感技术领域。本发明提供的检测试剂盒检测蓖麻毒素B链RTB时，RTB被蓖麻毒素B链适配体捕获，Fe3O4@SiO2(FITC)纳米粒子能够增强生物相容性并增加荧光信号读出，磁性纳米配对探针中的Fe3O4纳米粒子引起△T2的显著变化，同时导致导致荧光信号发生变化，从而实现RTB的弛豫开关‑荧光双模式检测。本发明提供的检测试剂盒结合了MRS简单、灵敏、快速的特点和荧光分析的稳定性、特异性和不受复杂环境干扰的特点，可以实现蓖麻毒素B链的高灵敏度和高选择性的检测。而且，本发明提供的检测试剂盒具有良好的储存稳定性。

摘要： 本发明属于生物技术领域，更具体地，本发明公开了蓖麻毒素的功能表位YYYS和EXITH，其中X可以为任意氨基酸，与其分别特异性结合的单克隆抗体6C2和13G6的氨基酸序列及编码上述抗体的核甘酸序列。本发明还公开了上述抗体在制备预防或治疗蓖麻毒素中毒药物中的用途。

摘要： 本发明公开了特异结合蓖麻毒素的肽、编码它们的核酸以及检测和抑制蓖麻毒素的方法。优选地，本发明的肽具有SEQ ID NO：1－12任何一个所示的氨基酸序列。

摘要： 本发明涉及特异识别蓖麻毒素B亚基的RNA核酸适配体9.26的序列和修饰，以及修饰后的9.26在拮抗蓖麻毒素细胞毒方面的应用。本发明涉及9.26在生物医药方面的应用。9.26作为中和毒素作用的组成部分，用于蓖麻毒素治疗或者拮抗蓖麻毒素中毒发生、发展、进程相关的基础研究等。9.26适配体作为解毒剂中和蓖麻毒素中毒方面的应用。本发明的方法简单，迅速，灵敏，适用于临床蓖麻毒素中毒的辅助诊断、生物导向治疗，具有广泛临床应用和基础应用前景。

摘要： 本发明公开了一种联合检测相思子毒素和蓖麻毒素的胶体金试纸及专用单克隆抗体。抗相思子毒素的单克隆抗体，是由保藏编号为CGMCC No.4062的Abrin-a A链单克隆抗体细胞株分泌的。本发明的胶体金试纸具有敏感度高、特异性高、精密度高、准确度高、成本低、操作简单、检测时间短、适合各种单位使用、储存简单、保质期长的优点。用本发明试纸检测相思子毒素的方法，简便、快速、直观、准确，适用范围广，成本低，易推广应用。

摘要： 本发明公开了一种蓖麻毒素的均相免疫检测方法及试剂盒。本发明试剂盒包括反应试剂A和反应试剂B反应试剂A由作为荧光供体的式Ⅰ所示镧系穴状化合物和偶联的捕获分子组成；捕获分子为抗蓖麻毒素抗体；反应试剂B由作为荧光受体的别藻蓝蛋白和偶联的检测分子组成；检测分子为抗蓖麻毒素抗体。本发明中，当靶标物存在时，捕获分子与检测分子靠近，当三者结合后通过能量传递产生特异的荧光信号。本发明方法灵敏度高，可利用镧系稀土离子长荧光寿命的特点降低本底干扰；特异性强，不易发生非特异性检测；所需样本量少，操作方便，无需清洗，极适用于现场检测；检测的反应过程和检测过程可以一体化，可用于高通量检测。

摘要： 本发明公开了特异性结合蓖麻毒素的抗体或其活性片段、包括所述抗体的胶体金免疫层析检测试纸或试剂盒及其应用。本发明的检测试纸或试剂盒生产方便，效果稳定，无非特异反应，包被量低，有利于大批量生产。本发明的方法操作简便快捷、重现性好、极其方便现场使用，该方法的建立不仅丰富了现有的蓖麻毒素检测方法，同时也为蓖麻毒素中毒的治疗以及紧急预防奠定基础。