加味丹玄口康通过Axin1调节口腔上皮损伤细胞增殖活性

摘要

目的探究加味丹玄口康(DXKK)对口腔上皮损伤细胞增殖活性的影响及轴抑制蛋白1(axis inhibition protein 1,Axin1)的作用。方法选取不同干扰位点的Axin1干扰小RNA-1(small interfering RNA-1,siRNA-1)、Axin1 siRNA-2和Axin1 siRNA-3干预口腔上皮细胞,qRT-PCR检测Axin1的基因表达水平来筛选Axin1的有效干扰靶点。将细胞随机分为空白对照组、干扰对照组、Axin1干扰组、过表达对照组和Axin1过表达组,采用qRT-PCR检测Axin1 mRNA的表达水平,采用细胞计数试剂盒和平板克隆检测细胞增殖情况,采用流式分析检测细胞周期水平,采用Western blot检测Axin1、β-catenin、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、Bax、Bcl-2和cleaved Caspase-3蛋白的表达。采用氢溴酸槟榔碱(arecoline hydrobromide,AH)诱导口腔上皮细胞损伤模型,将口腔上皮细胞随机分为空白对照组、AH刺激组(50μg/mL)、空白血清干预组(10%空白血清+50μg/mL AH)、含DXKK血清干预组(10%含DXKK血清+50μg/mL AH)、含DXKK血清干预+Axin1过表达组(10%含DXKK血清+Axin1过表达质粒+50μg/mL AH),EdU染色检测口腔上皮细胞的增殖活性。结果与干扰对照组比较,Axin1干扰-1组、Axin1干扰-2组和Axin1干扰-3组Axin1的基因表达水平均显著降低(P<0.01);Axin1干扰组细胞增殖活性和β-catenin、PCNA、Bcl-2蛋白表达均显著升高(P<0.01),Axin1、Bax、cleaved Caspase-3蛋白和Axin1 mRNA的表达均显著降低(P<0.05或P<0.01)。与过表达对照组相比,Axin1过表达组处于G1期的细胞比例、细胞增殖活性和β-catenin、PCNA、Bcl-2蛋白表达均显著降低(P<0.01),处于S期的细胞比例和Axin1、Bax、cleaved Caspase-3蛋白及Axin1 mRNA的表达均显著升高(P<0.01)。与空白对照组比较,AH刺激组Axin1蛋白表达显著增加(P<0.01),细胞增殖活性显著降低(P<0.01)。与空白血清干预组比较,含DXKK血清干预组Axin1蛋白表达需显著降低(P<0.01),细胞增殖活性显著升高(P<0.01)。与含DXKK血清干预组比较,含DXKK血清干预+Axin1过表达组细胞增殖活性显著降低(P<0.05)。结论Axin1可调控口腔上皮细胞增殖活性。DXKK通过抑制Axin1信号,促进AH诱导的口腔上皮细胞增殖。