人脐带血造血干细胞的分离和体外扩增

摘要

目的:通过对人新鲜脐带血造血干细胞的体外分离,探讨不同细胞生长因子的体外培养体系对CD34+细胞的扩增作用.方法:用SCF、FL、GM-CSF、IL-3、IL-6、G-CSF、TPO组合成不同的实验组,对脐血中分离的CD34+细胞进行21 d的体外培养,扩增后经流式细胞仪分析,从而求得细胞培养较好的细胞因子组合.结果:不同细胞因子组细胞培养孔CD34+细胞比例在培养7 d时已经开始上升,10 d时继续上升,到14 d达高峰,继续培养18d,CD34+细胞比例逐渐下降,但仍高于培养前水平,培养21 d,CD34+持续下降.总细胞数在第一周即扩增35.32倍,10～14 d总细胞数扩增331.7倍,21 d总细胞数扩增422.2倍,SCF+IL-3+IL-6+TPO+FL细胞因子组合对总细胞扩增最多,SCF+IL-3+IL-6+GM-CSF+G-CSF对总细胞扩增略少,其次是SCF+TPO+FL细胞因子组合,最少为SCF+IL-3+IL-6+GM-CSF细胞因子组合,细胞涂片染色观察,体外培养14 d,细胞胞体小,胞浆量少,胞核体积大,规则,为早期造血干细胞.结论:体外HSC培养,细胞因子对细胞的增殖有明显的作用,但不同的细胞因子组合对细胞的扩增作用有明显的不同.