重组溶瘤2型单纯疱疹病毒荧光定量PCR检测方法的建立与验证

摘要

目的为了建立高效、敏感的针对重组溶瘤2型单纯疱疹病毒(oHSV2)的荧光定量PCR方法。方法依据oHSV2的基因序列,登录Beacon Designer 8.0软件设计引物,提取前期已重组好的阳性质粒pHG52d34.5CMVhGM-CSF,测定浓度并换算后梯度稀释为荧光定量PCR的模板,进行PCR反应。结果经过多次调整实验的反应条件和反应体系,熔解曲线为单一峰,该病毒与野生型Ⅰ型单纯疱疹病毒、野生型Ⅱ型单纯疱疹病毒等没有交叉反应。oHSV2最低检测限为1000 copies/μL,R^2可达0.997,批内及批间变异系数分别为0.357%~1.156%和1.06%~3.35%,体液(血液)中预加的oHSV2的回收率为96.6%~109.3%。结论成功建立了oHSV2的SYBR Green实时荧光定量PCR方法,可特异而灵敏地检测血浆中的oHSV2。