降解AFB1的克雷伯氏菌分离、鉴定及降解机理初步研究

摘要

为了获得对黄曲霉具有降解作用的菌株,以秸秆、牛粪、土壤、发霉玉米及花生为研究对象,以香豆素为唯一碳源,筛选获得了能够降解黄曲霉毒素B1(AFB1)的多个菌株.通过生理生化及16S rDNA基因序列分析确定菌株种类;通过优化获得了对AFB1具有最优降解效果的培养基组成;采用蛋白酶K和SDS处理发酵上清液,初步判断具有降解作用的物质;采用SDS-PAGE电泳分析比较了不同培养基中发酵培养基上清液的蛋白图谱,并选择差异条带进行质谱鉴定;采用不同萃取剂对降解后的产物进行萃取并进行全波长扫描与液质联用分析,确定降解产物的分子量,并对其可能的结构进行推测.结果 表明:克雷伯氏菌(Klebsiella sp.)N1在DJN培养基对黄曲霉毒素降解效果最好,37 °C、72 h内降解率为74％,上清液中存在降解AFB1的物质,初步推断为酶;差异蛋白条带质谱分析结果显示,对黄曲霉毒素有降解效果的酶可能为Mn-超氧化物歧化酶(SodA)或NADH-醌氧化还原酶(NuoB);降解产物的全波长扫描结果显示其最大吸收峰为310 nm左右;正丁醇作为最优萃取剂,采用LC-MS/MS对降解产物进行初步分析,结果显示其分子量为241.1,推测其呋喃环上的8、9位双键以及12位的甲氧基被破坏.