抗DR5单链抗体的构建与表达

摘要

目的:构建抗DR5单链抗体的真核表达载体,以实现真核表达.方法:RT-PCR法从分泌抗DR5抗体的杂交瘤细胞中合成第一链cDNA,用通用引物钓取单克隆抗体的轻、重链可变区基因.经测序和BLAST比对,证实为一株新的鼠源性抗体基因.利用overlapping PCR方法构建单链抗体真核表达载体pCMV-express-scFv,Lipofectamine2000法转染宿主细胞293T,72h后ELISA法检测细胞培养上清.检测抗体表达.结果:经序列鉴定和BLAST比对证实克隆的抗体轻、重链可变区基因为新鼠源抗体基因.ELISA实验结果显示抗体有效表达在细胞培养上清中.结论:成功得到抗体轻、重链可变区基因,实现了抗DR5单链抗体的真核表达,为进一步的研究和开发奠定了基础.