猪流感病毒NP蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

摘要

为了制备猪流感病毒(SIV)核蛋白(NP)的单克隆抗体(MAb),采用差速离心法纯化H1N1和H3 N2亚型SIV后交叉免疫BALB/c小鼠,利用淋巴细胞杂交瘤技术制备杂交瘤细胞,通过建立的免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)单克隆抗体检测方法进行筛选.获得3株能稳定分泌抗NP蛋白的杂交瘤细胞,分别命名为16 D5、18 G8和20 C4,将它们诱导小鼠产生的腹水IPMA效价分别为1×10-6、1×10-6和1×10-5.亚型鉴定结果显示,3株单克隆抗体的重链均为IgG1,轻链为κ链.3株单克隆抗体特异识别H1 N1、H3 N2、H5 N1、H7 N9和H9 N2亚型流感病毒,并且与猪圆环病毒2型、猪伪狂犬病毒和猪细小病毒无交叉反应.Western blot检测结果表明,3株杂交瘤细胞培养上清均在56 ku附近出现一条特异性的蛋白质条带,说明针对SIV的NP蛋白制备了3株单克隆抗体.综上,成功制备了针对SIV NP蛋白的3株单克隆抗体,可识别不同亚型的SIV.