轮状病毒SA11株NSP2蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备

摘要

构建轮状病毒SA11株NSP2蛋白原核表达质粒,纯化重组蛋白并制备多克隆抗体.根据GenBank中登录的轮状病毒SA11株NSP2基因组序列(LC178571.1)设计特异性引物,用PCR方法扩增并将其连接至pET-28a(+)载体,构建重组表达质粒pET-28a-NSP2,转化至E.coli BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达,并通过SDS-PAGE和Western blot鉴定.将纯化后的重组蛋白与ISA206佐剂乳化免疫豚鼠,制备NSP2多克隆抗体,并通过ELISA测定抗体效价.重组蛋白以包涵体的形式表达,相对分子质量为35 kDa,ELISA法测定多克隆抗体效价>1:5000.成功表达了轮状病毒SA11株NSP2蛋白并获得其多克隆抗体,为NSP2蛋白结构与功能的研究奠定基础.