白藜芦醇通过调节SIRT1改善环磷酰胺诱导的人颗粒细胞氧化应激损伤

摘要

目的探讨白藜芦醇(resveratrol,RES)对4-过氧化氢环磷酰胺(4-hydroperoxy cyclophosphamide,4-HC)诱导人颗粒细胞(granulosa cells,GCs)氧化应激损伤改善作用。方法收集体外受精-胚胎移植患者卵泡液GCs进行体外培养。苏木精-伊红染色和免疫组织化学染色对GCs鉴定,Cell Counting Kit-8(CCK-8)检测4-HC诱导GCs毒性和RES对4-HC诱导GCs毒性改善作用。将GCs分为3组:对照组、4-HC组、RES+4-HC组。CCK-8测定GCs存活率,活性氧荧光探针DCFH-DA检测GCs内活性氧(reactive oxygen species,ROS),水溶性四氮唑1测定超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD),钼酸铵法检测过氧化氢酶(catalase,CAT),Western Blot测定沉默信息调节因子2相关酶1(silent information regulator 1,SIRT1)蛋白表达。结果4-HC(0,1.0,2.5,5.0,7.5μmol/L)处理GCs,CCK-8结果显示随4-HC浓度增加,GCs存活率降低,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),选择2.5μmol/L 4-HC为后续4-HC模型浓度。RES(0、5、10、25、50、75μmol/L)处理GCs 2 h后加入2.5μmol/L 4-HC,结果显示,RES可提高GCs存活率,与4-HC组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。选择50μmol/L RES为后续改善浓度。对3组GCs处理后各项检测结果显示,与CON组比较,4-HC组GCs存活率、SOD、CAT降低,ROS增加(P<0.05)。与4-HC组比较,RES+4-HC组GCs细胞活率、SOD、CAT增加,ROS降低。Western Blot显示RES+4-HC组SIRT1升高,与其他2组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论RES可能通过增加SIRT1表达改善4-HC诱导GCs损伤。