ERK通路在凋亡细胞抑制CCL5表达中作用和机制的研究

摘要

目的 探讨细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)通路对凋亡细胞抑制脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导巨噬细胞分泌炎症性趋化因子5(CC cehemokine ligand 5,CCL5)的影响.方法 用Jurakt细胞制备凋亡细胞,并用流式细胞仪检测细胞凋亡率.用LPS刺激骨髓诱导巨噬细胞(bone marrow induced macrophages,BMDM)和RAW264.7细胞,观察凋亡细胞对LPS诱导的CCL5表达的影响.观察ERK通路在凋亡细胞抑制CCL5表达中的作用,用对照质粒PcDNA3.1、MEKK2/3和MEK5质粒转染RAW264.7细胞,分别以LPS(1 mg/L)、凋亡细胞(apo)和LPS(1mg/L) +apo作用RAW细胞6h,收集细胞,实时定量PCR技术检测CCL5 mRNA表达.阻断ERK通路,观察CCL5 mRNA表达量的变化.结果 LPS刺激组和LPS+凋亡细胞刺激组CCL5 mRNA表达明显高于空白组和凋亡细胞刺激组,LPS+凋亡细胞刺激组CCL5 mRNA表达明显低于LPS刺激组(P＜0.05).PD98059 5 mmoL/L、10 mmoL/L、20 mmoL/L组mCCL5 mRNA表达低于DMSO组,PD98059 10 mmoL/L、20 mmoL/L组mCCL5 RNA表达低于PD98059 5 mmoL/L组,PD98059 20 mmoL/L组CCL5 mRNA表达低于PD98059 10 mmoL/L组(P＜0.05).PcDN A3.1转染组、MEKK2/3转染组和MEK5转染组CCL5 mRNA水平明显高于对照组,MEKK2/3转染组和MEK5转染组CCL5 mRNA水平明显高于PcDNA3.1转染组,MEK5转染组CCL5 mRNA水平明显高于MEKK2/3转染组(P＜0.05).D98059组CCL5 mRNA衰变速度快于空白组(P＜0.05).结论 凋亡细胞能够抑制LPS诱导的CCL5表达,ERK通路在凋亡细胞抑制CCL5表达中发挥重要作用.