利用GFP-Trap技术筛选与TaTLP1相互作用的蛋白

摘要

小麦类甜蛋白基因TaTLP1,在植物抗病防御反应中起重要作用.为筛选与TaTLP1相互作用的蛋白,本研究拟通过Gateway定向克隆技术构建带有GFP标签的重组载体TaTLP1-pEarleyGate103,在烟草中完成异源表达.利用GFP-Trap技术获得与TaTLP1互作的蛋白,质谱分析明确其种类.通过Western blot检测TaTLP1表达情况,以GFP抗体检测,膜上曝光结果显示,在约44 kD处出现条带,证明TaTLP1蛋白在烟草中成功表达;质谱分析GFP-Trap获得的洗脱蛋白,表明获得的候选互作蛋白中定位于胞外的病程相关蛋白1(Pathogenesis-related protein 1,PR1)、非特异性脂质转移蛋白(Non-specific lipid-transfer protein,nsLTPs)等可能与TaTLP1存在互作.该试验为探索TaTLP1参与小麦抗叶锈病基因Lr19的防御反应机制奠定了理论基础.