抗CPAα毒素单链抗体基因的克隆和表达及其生物学特性研究

摘要

应用RT-PCR技术,从分泌具有中和活性的抗A型产气荚膜梭菌(CPA)α毒素单克隆抗体的杂交瘤细胞中,扩增出单链抗体(ScFv)基因,并将其定向克隆于表达载体pHOG21中,构建重组表达载体pHOG-2E3,转化至大肠杆菌XL1-Blue中,筛选出表达菌株XL1-Blue(pHOG-2E3).SDS-PAGE分析结果表明,在20℃用IPTG诱导培养时,表达的ScFv蛋白占菌体总蛋白的25%,ScFv蛋白主要以包涵体的形式存在,但在胞周质和培养上清中也能检测到ScFv蛋白,其中在胞周质中表达的ScFv蛋白占菌体可溶性蛋白的4%.生物学试验结果表明,ScFv基因表达产物不仅能够中和α毒素的磷酯酶C活性,而且对攻击致死剂量α毒素的小鼠产生良好的被动保护作用.