平足蛋白表达与OSCC患者临床特征的关系及其对CAL-27细胞株增殖和迁移的作用机制

摘要

目的探讨平足蛋白(podoplanin)表达与口腔鳞状细胞癌(OSCC)患者临床特征的关系及其对OSCC CAL-27细胞株增殖和迁移的作用机制。方法选取OSCC患者组织标本76例,采用免疫组织化学染色法检测组织中Podoplanin含量,据Podoplanin染色阳性细胞数量和色彩深浅综合得分分为Podoplanin低表达组(≤1分)和高表达组(>1分),收集2组患者的临床特征资料和预后信息,采用χ^(2)检验、Kaplan-Meier法及时序检验分析2组患者临床特征和预后的差异;使用Podoplanin si-RNA及质粒转染处理人OSCC细胞CAL-27,设置空白组、空白沉默(空白过表达)组及沉默(过表达)组,Western blot及实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)验证沉默及过表达效果后将细胞分为对照组、沉默组及过表达组,采用噻唑蓝比色法(MTT)法检测各组细胞12、24及48 h的增殖能力,采用细胞集落形成实验检测各组细胞培养48 h的细胞集落形成率,采用流式细胞仪和Transwell法检测24 h各组细胞周期和细胞迁移能力,采用Western blot法检测对各组细胞中磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路相关蛋白的表达。结果免疫组织化学染色结果显示,低分化OSCC患者口腔癌组织Podoplanin染色阳性细胞数多于高分化患者;低分化及淋巴结转移组OSCC患者的Podoplanin高表达率高于高分化及无淋巴结转移组(P<0.05),高表达组OSCC患者的总生存期(OS)低于低表达组(P<0.05);与对照组比较,沉默组CAL-27细胞中Podoplanin蛋白及mRNA表达下降、而在过表达组表达升高(P<0.05);与对照组相比,Podoplanin过表达组CAL-27细胞24 h时细胞增殖明显,而48 h时沉默组细胞增殖及集落形成能力明显降低,但过表达组则明显增加(P<0.05);与对照组相比,Podoplanin沉默组CAL-27细胞G1/S比值升高、过表达组降低(P<0.05);与对照组相比,Podoplanin沉默组CAL-27细胞迁移能力降低、而过表达组升高(P<0.05);与对照组相比,Podoplanin沉默组CAL-27细胞中p-AKT/AKT和p-PI3K/P13K比值降低,而过表达组升高(P<0.05)。结论OSCC患者Podoplanin的表达水平与肿瘤分化程度及淋巴结转移密切相关,可影响患者预后,其机制可能与PI3K/AKT磷酸化水平调控细胞的增殖及迁移有关。