多系统萎缩患者TCR α链CDR3谱系的荧光定量PCR溶解曲线

摘要

目的:利用荧光定量PCR溶解曲线分析技术检测1例多系统萎缩患者TCR α链CDR3谱系.方法:提取1例多系统萎缩患者和1例正常人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中的总RNA,逆转录成cDNA,以32个人TCR α链胚系可变区基因家族 (TRAV)设计上游引物,共同的TCR α链恒定区基因家族(TRAC)设计下游引物,荧光定量PCR(FQ-PCR)扩增32个TRAV基因各家族CDR3谱系,溶解曲线法分析各家族CDR3谱系的单、寡、多克隆增生,挑选单克隆进行PCR扩增,扩增产物行普通琼脂糖凝胶回收后测序分析.结果:多系统萎缩患者和正常人PBMC的32个TCR α链TRAV家族CDR3谱型的FQ-PCR产物的各家族相对定量表达不一;正常人的32个TCR α链TRAV家族CDR3谱型的溶解曲线图表现为多个峰型的高斯分布,多系统萎缩患者的TRAV10、TRAV15、TRAV29家族CDR3谱型的溶解曲线表现为单峰的克隆性增生,其他家族为多峰、寡峰的多克隆及寡克隆增生,未出现缺失的家族,对单峰的TRAV15家族的测序得到的CDR3区的氨基酸组成为:SAIYFCAEDRDSTLTFG.结论:该多系统萎缩患者的PMBC中,存在TCR α链CDR3谱系漂移.