冷冻胚胎印记基因H19的DNA甲基化状态研究

摘要

目的:比较研究常规慢速冷冻和玻璃化冷冻后的人类早期胚胎印记基因H19的DNA甲基化状态,初步了解低温冷冻对胚胎基因印记的影响。方法:收集胚胎移植术后正常受精的低质量的第3天胚胎152个,进行冷冻、复苏,其中常规慢速冷冻胚胎78个,玻璃化冷冻胚胎74个,另收集70个新鲜未冷冻胚胎作为对照;记录3种类型单个胚胎Bisulfite-PCR扩增个数,采用结合重亚硫酸盐限制性酶分析法检测胚胎印记基因H19的DNA甲基化状态。结果:慢速冷冻胚胎、玻璃化冷冻胚胎及新鲜未冷冻胚胎的单个胚胎Bisulfite-PCR扩增分别成功40、53、58个;慢速冷冻胚胎、玻璃化冷冻胚胎及新鲜未冷冻胚胎H19基因的平均甲基化程度分别为(44.8±6.4)%、(47.5±5.6)%及(46.7±6.0)%,异常甲基化率分别为10.0%(4/40)、13.2%(7/53)及3.4%(2/58);3组胚胎的甲基化程度和异常甲基化率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:低温冷冻不增加人类胚胎甲基化异常的发生率。