马兜铃酪氨酸脱羧酶基因克隆、测序及同源性分析

摘要

[目的]从中草药马兜铃中获得酪氨酸脱羧酶基因(tyrDC)互补DNA(cDNA)序列并进行同源性分析,以进一步达到敲除tyrDC,减轻该药肾毒性的目的.[方法]参照已知的植物酪氨酸脱羧酶的保守性氨基酸序列设计简并引物,并通过反转录聚合酶链反应(RT-PCR)从马兜铃中扩增出eDNA片段.将扩增的cDNA序列克隆并测序,用以设计特异引物,并通过cDNA末端快速扩增(Rapid Amplification of cDNA Ends,RACE)从马兜铃中扩增出全长tyrDC cDNA.[结果]该克隆的tyrDC cDNA的总长度为1 678 bp,包括一个编码516个氨基酸的1 551bp开读框(ORF)和一段127bp的下游非翻译区(3'UTR).序列比较结果表明,由马兜铃tyrDC核苷酸序列推导的氨基酸序列分别与已发布的罂粟酪氨酸脱羧酶和唐松草酪氨酸/多巴脱羧酶享有76%和79%的同源性.[结论]从马兜铃中扩增得到tyrDC cDNA全序列,且对酪氨酸脱羧酶的同源检索显示,不同植物的酪氨酸脱羧酶之间都存在普遍的序列相似性.为去除马兜铃肾毒性奠定了基础.