槐定碱对肺腺癌细胞A549顺铂敏感性及miR-216a-5p/ZEB1轴的影响

摘要

【目的】观察槐定碱对肺腺癌A549细胞耐药性和敏感性的影响。【方法】（1）将肺腺癌A549细胞随机分为对照组、槐定碱组、顺铂组和槐定碱+顺铂组。对照组常规培养，槐定碱组和顺铂组分别加入40μmol/L的槐定碱和2.0 nmol/L的顺铂，槐定碱+顺铂组同时加入40μmol/L槐定碱和2.0 nmol/L顺铂，处理24 h后，平板克隆实验测定细胞集落形成能力，流式细胞仪测定细胞凋亡率。（2）将肺腺癌A549细胞随机分为对照（control）组，抑制剂阴性对照（inhibitor-NC）组、抑制剂（inhibitor）组、槐定碱+inhibitor-NC组、槐定碱+inhibitor组、槐定碱组，相应干预后，实时定量聚合酶链反应（RT-qPCR）法检测细胞中miR-216a-5p和锌指E盒结合蛋白1（ZEB1）mRNA表达，双荧光素酶报告基因系统验证miR-216a-5p与ZEB1的靶向关系，Western Blot法检测细胞中ZEB1、B细胞淋巴瘤2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）表达。【结果】（1）与对照组比较，槐定碱组、顺铂组和槐定碱+顺铂组细胞集落数均减少，细胞凋亡率升高（均P＜0.05）；槐定碱+顺铂组细胞集落数少于槐定碱组和顺铂组，细胞凋亡率高于槐定碱组和顺铂组（均P＜0.05）。（2）与control组和inhibitor-NC组比较，inhibitor组miR-216a-5p表达及Bax蛋白表达降低，ZEB1 mRNA和蛋白及Bcl-2蛋白表达水平升高（均P＜0.05）；与control组比较，槐定碱组miR-216a-5p表达及Bax蛋白表达水平升高，ZEB1 mRNA和蛋白及Bcl-2蛋白表达水平降低（均P＜0.05）；与inhibitor组比较，槐定碱+inhibitor组miR-216a-5p表达及Bax蛋白表达水平升高，ZEB1 mRNA和蛋白及Bcl-2蛋白表达水平降低（均P＜0.05）；与槐定碱组、槐定碱+inhibitor-NC组比较，槐定碱+inhibitor组miR-216a-5p表达及Bax蛋白表达水平降低，ZEB1 mRNA和蛋白及Bcl-2蛋白表达水平升高（均P＜0.05）。双荧光素酶实验结果显示，miR-216a-5p可靶向调控ZEB1表达。【结论】槐定碱可增强A549细胞对顺铂的敏感性，亦可通过上调miR-216a-5p靶向降低ZEB1表达，发挥抗肺腺癌作用。