miR-145调控IL-9抑制肝癌腹水的机制研究

摘要

目的:探讨miR-145调控肝癌腹水模型中IL-9的作用机制.方法:取20只雄性C57BL/6小鼠,腹腔内接种H22肝癌细胞构建肝癌腹水瘤模型,随机分为miR-145激动剂(agomir)组和阴性对照(NC)组,分别经尾静脉注射miR-145 agomir和miR-145 NC.造模两周后,抽取两组腹水测定腹水体积,制备腹水涂片,行苏木精—伊红(HE)染色;实时荧光定量PCR(qPCR)法检测脾脏miR-145、Kirsten大鼠肉瘤病毒癌基因同源物(KRAS)、神经母细胞瘤RAS病毒癌基因同源物(NRAS)、蛋白激酶B(Akt)、细胞核因子KBp65(NF-κBp65)、白细胞介素-9(IL-9)mRNA表达水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测脾脏IL-9含量,Western blotting法检测大鼠肉瘤蛋白(RAS)、Akt、细胞核因子κB抑制蛋白α(IκB-α)、NF-κB蛋白表达.比较两组小鼠生存时间.结果:与NC组相比,miR-145 agomir组小鼠腹水体积显著降低(P＜0.01).miR-145 agomir组小鼠生存时间为(19.10±0.65)d,较NC组(17.00±0.50)d明显延长(P＜0.01).与NC组相比,miR-145 agomir组脾脏中miR-145表达显著升高(P＜0.01),KRAS、NRAS、Akt、p65、IL-9 mRNA表达均显著下降(P＜0.05),RAS、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、磷酸化IκB-α(p-IκB-α)、p65、p-p65及IL-9蛋白水平表达均显著降低.结论:miR-145激动剂可以抑制腹水形成,延长肝癌腹水模型小鼠生存时间.miR-145抑制肝癌腹水IL-9的表达,可能与其抑制RAS/Akt/IκB-α/NF-KB通路有关.