HIF-1α靶向RNAi慢病毒载体的构建及对Panc-1细胞HIF-1α抑制作用的研究

摘要

目的:构建针对缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因的RNA干扰(RNAi)慢病毒表达载体,并研究其对胰腺癌Panc-1细胞HIF-1α基因表达的抑制作用.方法:针对HIF-1α基因序列设计合成4条shRNA片断并构建RNAi慢病毒载体,同时构建HIF-1α基因过表达质粒.过表达质粒和RNAi质粒共转染293T细胞后应用Western blot进行外源筛靶.将外源筛靶成功的干扰质粒psc1516进行慢病毒包装,再感染Panc-1细胞,Western blot和荧光定量PCR检测沉默前后Panc-1细胞中HIF-1α的蛋白及mRNA的表达.结果:经PCR及测序证实4种干扰载体及1种过表达载体构建成功,Western blot外源筛靶显示4个靶点均能有效敲减目的基因的表达.细胞试验表明psc1516干扰载体能有效抑制Panc-1细胞中HIF-1α的mRNA及蛋白的表达,当MOI＝4时,对HIF-1α mRNA的抑制率为87.4%,蛋白抑制率达90.0%以上.结论:RNAi慢病毒载体可有效地抑制胰腺癌Panc-1细胞中HIF-1α的表达.