冰冻葡萄粉及其多酚化合物抗凋亡的分子生物学机制研究

摘要

目的:探索冰冻葡萄粉抗胆酸诱导细胞凋亡的机制并调查冰冻葡萄粉中多酚化合物在此过程中的作用.方法:应用牛磺酸脱氧胆酸(TDCA)诱导Huh7细胞凋亡,同时用冰冻葡萄粉及其多酚化合物如表儿茶素、花青素、槲皮素、白藜芦醇进行干预,应用MTT法检测细胞活力,荧光探针DCFH-DA测定细胞内活性氧(ROS)生成量.免疫印迹法分析信号传导途径.结果:冰冻葡萄粉能显著降低TDCA诱导Huh7细胞产生的细胞内活性氧,凋亡蛋白Bax表达,并减少细胞色素C从线粒体内释放,抑制激活caspase-9, caspase-7和 caspase-3.在300 μg/mL浓度的冰冻葡萄粉中,4种多酚化合物只有槲皮素显示微弱保护细胞防止线粒体介导的凋亡.增加多酚化合物的剂量才能出现明显的细胞保护效应.4种多酚化合物按300 μg/mL的冰冻葡萄粉中各自的含量组合能够一定程度重现冰冻葡萄粉的抗凋亡效应.结论:冰冻葡萄粉降低氧化应激和线粒体介导的凋亡,其作用机制是防止线粒体损伤,抑制TDCA诱导的活性氧生成和激活的凋亡信号传导.推测表儿茶素、花青素、槲皮素是冰冻葡萄粉抗氧化、抗线粒体途径凋亡的重要活性成分.