ELISA测定中HRP/TMB显色体系的优化及稳定性研究

摘要

为建立ELISA测定中HRP/TMB显色体系的优化方法,开发一种灵敏度高、性能稳定的HRP/TMB显色液,实验采用单因素试验,考察了pH、TMB质量浓度、过氧化脲质量浓度、DMSO体积分数、甘油体积分数和显色时间对显色效果的影响;采用L9(34)正交实验,进行了工作条件优化;最后,对自制的显色液进行了贮藏稳定性研究,并与3种商品化同类产品进行了质量对比.结果显示:HRP/TMB显色体系的最佳工作条件为pH 5.0,TMB质量浓度0.4 g/L,过氧化脲质量浓度0.4 g/L,DMSO体积分数2%,甘油体积分数5%,显色时间10 min;4℃储藏90 d,稳定性良好;与商品化产品对比,自制显色液的灵敏度较高,显色时间较短,但稳定性较差.实验提供了一种HRP/TMB显色体系的优化方法及显色液配方,能满足大部分实验室ELISA研究需求,但其稳定性尚不能达到商品化产品需求,需进一步研究.