不同培养液添加物对尼罗罗非鱼精原干细胞生长增殖的影响

摘要

[目的]探讨不同血清和细胞因子等培养液添加物对尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)精原干细胞(Spermatogonial stem cells,SSCs)生长增殖的影响.[方法]无菌取发育第Ⅲ期的尼罗罗非鱼精巢组织,用酶消化法结合差速贴壁法获得尼罗罗非鱼SSCs,在有支持细胞饲养层条件下,L-15培养液中分别添加体积分数2％、5％、10％新生牛血清(New bovine serum,NBS),体积分数1％、2％、3％罗非鱼血清以及5、10、15 ng/mL白血病抑制因子(Leukemia inhibitor factor,LIF),比较不同添加物对尼罗罗非鱼SSCs生长增殖的影响.[结果]在支持细胞饲养层上,SSCs分裂指数明显高于无饲养层的SSCs,支持细胞饲养层明显促进精原干细胞分裂增殖(P＜0.01);与2％、10％NBS组相比,添加体积分数5％NBS可显著促进精原干细胞增殖(P＜0.01);添加体积分数1％、2％、3％尼罗罗非鱼血清对SSCs无显著的促增殖作用(P＞0.05);添加5、10 ng/mL LIF可促进SSCs增殖,添加10 ng/mL LIF效果更佳,添加15 ng/mL LIF则抑制SSCs增殖.[结论]使用尼罗罗非鱼精巢支持细胞作饲养层,用添加体积分数5％NBS及10 ng/mL LIF的L-15培养液培养,有助于促进尼罗罗非鱼精原干细胞生长增殖.