表皮生长因子受体特异性单链抗体的筛选及初步鉴定

摘要

目的从大型人源抗体库Griffin 1中直接筛选出靶向EGFR的单链抗体。方法以稳定转染的CHO-EGFR-GFP1细胞和未转染的CHO-K1细胞分别作为EGFR阳性和阴性细胞,采用负筛选的方法进行筛选;通过比较每轮投入及洗脱出噬菌体的效价比以及细胞ELISA检测多克隆p-scFv与阳性、阴性细胞结合情况对筛选过程进行监测;采用菌落PCR挑选含有全长scFv片断的菌落,进一步用细胞ELISA检测单克隆p-scFv与EGFR阳性及阴性细胞结合特异性;挑选EGFR特异性单克隆p-scFv采用DNA测序法确定克隆多样性。结果经过5轮筛选,细胞裂解液中洗脱出噬菌体效价有500倍以上增长;细胞ELISA结果显示多克隆p-scFv与CHO-EGFR-GFP1细胞和CHO-K1细胞均有明显结合,但有部分特异性结合EGFR;菌落PCR显示约45%克隆中含有完整的1kb scFv片断;经细胞ELISA、DNA测序检测共获得1株EGFR特异性单链抗体,命名为F4-scFv。结论F4-scFv可与筛选中所用EGFR阳性细胞特异性结合,为进一步研制以此单链抗体为靶向分子的抗肿瘤药物奠定了基础。