日本血吸虫单克隆抗抗独特型抗体NP48单特异性双链抗体的构建表达与初步鉴定

摘要

目的构建和表达日本血吸虫单克隆抗抗独特型抗体NP48单特异性双链抗体,并初步鉴定表达产物活性。方法应用SOE法扩增双链抗体基因VH-linker-VL(Diabody,简称D)。将D重组入原核表达载体pBAD/gⅢ。表达质粒转化E.coliTOP10,左旋阿拉伯糖诱导表达。对D的表达产物进行分离纯化,采用Dot-ELISA法检测纯化蛋白与NP30、可溶性虫卵抗原(SEA)、可溶性成虫抗原(SWAP)的结合活性。结果测序证实双链抗体基因D构建成功;构建了D的原核表达系统,诱导表达产物主要以包涵体形式存在,分子量约为27kD;经纯化、变性复性后用Dot-ELISA法鉴定结果表明,D表达的纯化蛋白可与NP30特异性结合。结论所构建、表达的NP48单特异性双链抗体具有亲本单抗的部分特性。