基于生物膜干涉技术的单克隆抗体高通量定量检测方法的建立

摘要

目的 运用生物膜干涉(BLI)技术,建立高通量定量检测单克隆抗体浓度的方法 .方法 使用Octet Red 96分子相互作用分析仪,根据样品与protein A传感器结合后光相对干涉位移变化,检测抗体浓度,并对这种检测方法 进行方法 学考察.结果 pro tein A传感器能特异性地与单克隆抗体结合,抗体工作标准品浓度在7.81～500μg/m L与结合速率呈良好的回归关系,相关系数R2为0.9999;检测限为0.6μg/m L,定量限为2μg/mL;回收率为98.90％ ～100.40％;重复性的相对标准偏差(RSD)为2.17％,中间精密度的RSD为2.52％;45 d内protein A传感器重复使用60次,阳性对照值的RSD为3.7％;再生液pH变化±0.2、平衡液吐温-20比例变化±5％ 的RSD值为0.99％.检测温度与转盘速度的变化是影响样品定量检测的因素,检测结果 与高效液相数据高度一致(R2=0.90).结论 运用BLI技术能实现高通量定量检测单克隆抗体浓度,该方法 具有样品适应性强、分析速度快、准确度高的优势,可用于单克隆抗体细胞株的筛选、排序及蛋白表达的检测与监控.