有机溶剂对棉铃虫N-乙酰氨基葡糖苷酶活力的影响

摘要

以棉铃虫为材料,经(NH4)2SO4分级沉淀、Sephadex G-200分子筛凝胶过滤柱层析和DEAE-32离子交换柱层析分离纯化,获得棉铃虫N-乙酰氨基葡糖苷酶酶制剂.研究几种有机溶剂对棉铃虫N-乙酰氨基葡糖苷酶(EC3.2.1.14)的活力与构象的影响.结果表明:甲醇、乙醇和乙二醇对酶有先扬后抑的作用,正丙醇和丙三醇对酶有失活作用.低含量的丙酮(体积分数为12.5%)对酶有可逆失活作用,随着丙酮含量的提高,其酶促反应的动力学参数也随之改变,Vmax值降低,Kmapp值不变.在278 nm波长激发下,天然酶内源荧光在339 nm处有特征的荧光发射,其强度随着丙酮含量的上升而减弱,荧光发射峰也逐渐蓝移.这表明丙酮改变了酶的构象.