Tat-p53融合蛋白的表达、纯化及其转导活性

摘要

目的：原核表达野生型p53与Tat PTD（protein transduction domain）的融合蛋白，检测TatPTD介导p53进入肝细胞的效率。方法：利用RT-PCR方法从A549细胞系中分离野生型p53基因，将该基因分别克隆入pTAT-HA和pET-32a原核表达载体，在大肠杆菌BL21（DE3）LysS内诱导表达并进行纯化，以纯化的p53蛋白经腹腔免疫BALB/c小鼠，制备高效价的抗血清，将Tat-p53融合蛋白加入HepG2细胞培养上清，利用间接免疫荧光法检测Tat-p53融合蛋白导入HepG2细胞的效率。结果：成功地构建了含有野生型p53基因的原核表达载体，表达纯化了Tat-p53融合蛋白及p53蛋白，制备p53特异的抗血清，证实Tat-p53可以高效的转入HepG2细胞内。结论：Tat-p53融合蛋白的表达纯化及活性分析，为应用Tat-p53融合蛋白治疗肝癌的实验研究奠定了基础。