GST-P58IPK融合蛋白的表达、纯化及活性鉴定

摘要

目的：获得谷胱甘肽S转移酶(GST)-P58IPK融合蛋白，以用于阐明流感病毒相关因子P58IPK参与的信号通路调控机制。rn 方法：以RT-PCR方法扩增目的基因P58IPK，将其克隆至原核表达质粒pGEX-6p-1。将所构建的pGEX-6p-1-P58IPK重组质粒转化大肠杆菌Rosetta(DE3)，并诱导表达，利用谷胱甘肽-Sepharose 4B亲和柱进行纯化，所得产物进行SDS-PAGE、Western blot及体外活性鉴定。rn 结果：大肠杆菌细胞经诱导表达出相对分子量约为85kDa的蛋白，与GST-P58IPK融合蛋白大小相符；Western blot显示该融合蛋白能够被抗GST的抗体特异性识别，磷酸化实验表明GST-P58IPK融合蛋白能够抑制PKR的体外磷酸化。rn 结论：在大肠杆菌表达系统中表达了有活性的GST-P58IPK融合蛋白，为PKR信号通路的研究奠定了基础。