锚定聚合酶链反应用于扩增人基因组DNA未知序列

摘要

为了探索锚定聚合酶链反应(A-PCR)能否用于分析基因组DNA未知序列,作者以X连锁遗传病Duchenne型肌营养不良症(DMD)为例进行了探讨.首先合成3段与DMD基因cDNA序列相应的寡聚核苷酸引物,以正常女性基因组DNA为模板,直接进行单引物单向扩增,创造出Taq DNA聚合酶聚合能力可及长度的目的DNA单链,然后于其3’末端添加同聚物尾和锚定片段,在55～60℃较高退火温度和1.5～2.0min严格延伸时间的控制下进行PCR循环,分别获得500 bp,400 bp和900 bp 3个DNA片段.该法特异性强,操作简单,不失为分子生物学研究中的一个有用的工具。