耐热链替代扩增反应(tSDA)用于HBV DNA保守序列扩增的初步研究

摘要

目的：链替代扩增反应（SDA）是一种体外等温核酸扩增方法,基于限制性内切酶打开缺口和无外切酶活性的DNA聚合酶在缺口处聚合替代的原理.该研究将其用于乙型肝炎病毒DNA保守区的扩增,旨在了解SDA方法在简化程序、扩增效率和敏感性方面是否存在优势,为探讨其用于基因芯片杂交的可行性奠定基础.方法：从DDBJ／EMBL数据库中调取乙型肝炎病毒（HBV）全基因组序列共77条,其涵盖了A～G7个基因型和两个未定型的序列.用ClustaIX序列分析软件对上述序列进行对比,找到HBV DNA的保守序列,并结合SDA常用限制性内切酶识别序列,设计并合成SDA引物和其它特异引物.结论：尽管SDA不需要温度循环,但从该研究结果来看,SDA反应影响因素较多,较难控制和标准化,造成结果缺乏稳定性.SDA能否作为一种基因芯片应用中理想的扩增方法还有待于对该技术的进一步改进.

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