ILG1:在纽约实验室大肠杆菌菌株中发现一种与噬菌体整合酶相似的新p4(英文)

摘要

目的　免疫球蛋白类别转换在生发中心 B细胞中进行 ,从而 B细胞由产生 Ig M转换到产生其他类别的免疫球蛋白如 Ig G,Ig A,Ig E.目前导致类别转换的机制还不清楚 .我们试图克隆参与类别转换的基因 .方法　原发性免疫缺陷患者 B细胞不能进行类别转换 ,而正常细胞则可以 .据此 ,我们将患者与正常人的 B细胞在同一条件下分别培养以诱导类别转换 .从培养的细胞中分别提取 RNA,并反转录成 c DNA,由此制备扩增物 (amplicon) .最后将来源于患者 B细胞的扩增物与正常人 B细胞的扩增物混合在一起 ,在一定条件下进行剔除杂交 .经 5轮剔除杂交以后 ,将剔除共同基因以后的剩余物进行克隆 .经筛选以后将阳性克隆物进行测序及序列分析 .结果　在所有克隆中 ,我们发现一个新基因 ,命名为整合酶样基因 - 1.后证实 ,该基因来源于实验室细菌株 TOP10 F'序列分析表明 ,IL G1具有原核基因特性 ,但缺乏真核细胞的基因特性 .在 DNA水平 ,IL G1与任何基因都不具有同源性 ,但在蛋白水平 ,它与来源于溶原性 p4噬菌体的整合酶具有高达 5 8%的同源性 ,我们认为 IL G1定居于一个新的溶原性 p4原噬菌体 Φ- TOP10 F.IL G1的催化活性区具有高度保守特性 ,因为活性区的关键氨基酸残基是保守的 ,这包括高度保守的 R- H- R- Y结构 .