Id1启动子的荧光素酶报告基因载体的构建及其在肝癌HepG2细胞中的活性检测

摘要

目的:扩增Id1启动子基因,构建Id1启动子的报告基因载体.方法:通过PCR及双酶切方法,从HepG2细胞基因组DNA中获得Id1基因编码序列上游包含不同长度碱基的两段Id1启动子序列;分别克隆到报告基因pGL3-enhancer载体上,构建包含两段不同长度Id1启动子的报告基因载体;用脂质体转染法将两报告基因载体分别转染至肝癌HepG2细胞系;采用双荧光素酶报告基因系统评估Id1启动子活性.结果:经PCR方法扩增出大小分别为1096bp和266bp的两段不同长度的Id1启动子片段,序列测定其编码序列及读框正确,酶切鉴定亚克隆序列正确.瞬时转染HepG2后经报告基因检测,两段启动子均具有转录活性.结论:成功构建了Id1启动子的报告基因载体,为进一步研究Id1启动子和肝癌的关系奠定了实验基础.