结核分枝杆菌腺苷磷酰硫酸激酶的异源活性表达和酶学性质

摘要

PAPS是生物体内磺化反应的惟一活性磺酸基团供体.腺苷磷酰硫酸激酶是催化APS和ATP生成PAPS和ADP的一类酶.为实现PAPS的酶法合成,作者通过密码子优化来自结核分枝杆菌(Mycobacteriuim tuberculosis AUSMDU00018547)的腺苷磷酰硫酸激酶编码基因与共表达硫氧还蛋白TrxB,实现了腺苷磷酰硫酸激酶在大肠杆菌Escherichia coliBL21(DE3)中的异源高活性表达.采用His-Tag标签实现了对腺苷磷酰硫酸激酶的纯化,进一步酶学性质分析结果表明,重组腺苷磷酰硫酸激酶最适温度、最适pH以及比酶活分别为35°C、7.5和(1.26±0.08)U/mg.腺苷磷酰硫酸激酶的异源活性表达与酶学性质分析为未来实现酶法合成PAPS奠定了基础.