脯氨酸氨肽酶枯草芽孢杆菌分泌表达及特性表征

摘要

构建重组枯草芽孢杆菌大量分泌米曲霉脯氨酸氨肽酶,纯化后对其基本酶学性质进行表征.将脯氨酸氨肽酶cDNA序列从载体pMD19-pap上克隆后连接到载体pMA5上得到重组质粒,转化枯草芽孢杆菌WB600后进行分泌表达.通过在培养基中加入5％ D-山梨醇和2 mmol/LCaCl2,胞外酶活由7.5 U/mL提高到36 U/mL.通过硫酸铵盐析、Hitrap Q和SuperdexTM 75对重组脯氨酸氨肽酶进行了纯化,纯化后的比酶活为247.3 U/mg,纯化倍数达到8.8倍.该酶最适温度为50℃,最适pH为7.5,米氏常数Km和最大反应速率Vmax分别为0.171 mmol/L和55.99μmol/(L·min).