应用UV-X-IP分析酿酒酵母HSF和靶DNA的相互作用

摘要

利用紫外激光交联和免疫沉淀技术(UV laser crosslinking and immunoprecipitation, UV-X-IP)分析原核表达的酿酒酵母热激因子(heat shock factors,HSFs)和片段化的基因组靶DNA的相互作用.分别在ScSSA1、ScSSA4启动子区和编码区设计引物对免疫沉淀的DNA 进行PCR分析.结果发现,紫外激光交联和免疫沉淀DNA库中富集了ScSSA1、ScSSA4启动子区HSF结合的DNA片段,而没有编码区DNA,表明HSF特异结合了靶DNA.从未经紫外激光交联样品的免疫沉淀DNA库中未获得相应PCR扩增产物,说明紫外激光在酿酒酵母HSF与靶DNA之间形成共价结合中起重要作用.