壳聚糖固定化S-腺苷甲硫氨酸合成酶

摘要

在大肠杆菌中重组表达了S-腺苷甲硫氨酸合成酶,然后以壳聚糖为载体,戊二醛为交联剂,对酶进行固定化研究.结果表明,最佳固定化条件为:壳聚糖质量浓度为2.5g/dL、戊二醛体积分数为0.8％、固定化酶量为6 mg/mL、固定化时间为12 h,该条件下所得固定化酶活性回收率为76％,固定化酶热稳定性较好,在55℃下保温5h仍保留53％的活力,而游离酶在50℃下保温5h则完全失活.固定化酶在碱性溶液环境的稳定性较高,在pH 7.5～9.0的缓冲液中4℃保温10 h酶活性仍保留80％以上.将固定化酶用于S-腺苷甲硫氨酸的合成,连续反应5批次后,酶活性仍保留64％.在底物三磷酸腺苷(ATP)浓度为30 mmol/L的条件下,固定化酶催化底物ATP的转化率超过95％.