双酶体系高效制备(R)-2-氯-1-(3-氯苯基)乙醇

摘要

人工合成经密码子优化的羰基还原酶基因Sys1,并与葡萄糖脱氢酶基因Sygdh共克隆至双启动子表达质粒pETDuet-1中,获重组质粒pETDuet-Sygdh-Sys1.将其转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21 (DE3),构建了共表达羰基还原酶和葡萄糖脱氢酶的重组工程菌E.coliBL2 l/pETDuet-Sygdh-Sys1.以经IPTG诱导的重组菌为生物催化剂,不对称还原间-氯苯甲酰甲基氯(m-CPC),制备手性药物中间体(R)-2-氯-1-(3-氯苯基)乙醇((R)-CCE).在m-CPC 30 mmol/L、重组湿菌体70 mg/mL、葡萄糖40 mmol/L、辅酶NADP+ 0.2 mmol/L,以及pH 7.0、反应温度40℃和反应时间3h等条件下,所获手性化合物(R)-CCE的摩尔产率高达99.0％,对映体过量值(e.e.值)为100％.