竞争抑制酶联免疫吸附法快速检测金黄色葡萄球菌肠毒素P

摘要

目的 建立竞争抑制酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)快速检测金黄色葡萄球菌肠毒素P(staphylococcal enterotoxin P,SEP)的分析方法.方法 根据ELISA的检测程序,利用交叉方阵滴定法确定SEP抗原的最佳包被浓度及单克隆抗体的最佳倍比稀释浓度,再对辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠IgG(HRP-IgG)最佳稀释浓度及最佳反应时间进行筛选,然后通过测定450 nm处不同SEP抗原包被条件(包被液类型、包被环境)、封闭液类型及浓度、封闭时间、竞争反应温度、反应方式(预混反应、直接反应)下的OD值对检测条件进行优化,最后用灵敏度、批内变异、批间变异和加标样品回收率对方法进行评价.结果 SEP抗原最佳包被浓度为2.500 μg/mL,鼠单抗血清稀释度1:6000(V∶ V),酶标抗稀释度1∶3000(V∶ V);反应1h,最佳包被条件为磷酸盐缓冲液4°C过夜,10％脱脂乳封闭2 h,37°C直接竞争反应.此方法的线性回归方程为:Y=0.4166X-0.7415(r2=0.9908),灵敏度为0.954 μg/mL,批内及批间变异系数均低于3％,对人工污染的脱脂牛奶、LB(Luria-Bertani)液体培养基中肠毒素蛋白SEP的回收率高于98％.结论 该方法具有较好的回收率和稳定性,可应用于肠毒素蛋白SEP的快速检测.