麦胚无细胞蛋白合成系统表达人成纤维细胞生长因子21蛋白的研究

摘要

目的 通过构建麦胚无细胞蛋白合成系统(wheat germ cell-free protein synthesis system,WGCF)体外表达人成纤维细胞生长因子21(fibroblast growth factor 21,FGF21).方法 构建FGF21克隆载体,对FGF21基因进行克隆,提取DNA后通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩大底物浓度并体外转录成mRNA.制备麦胚抽提物溶液,加入反应底物、能源物质和相关酶系构建WGCF.以mRNA为模板利用WGCF体外合成FGF21重组蛋白,利用酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)对纯化后的FGF21重组蛋白进行检验,并计算WGCF合成FGF21重组蛋白的产量.结果 成功利用构建的WGCF表达了FGF21蛋白,最终合成产量为12.49 ng/mL.从基因层面到体外表达FGF21重组蛋白仅需2～3 d.结论 以麦胚抽提物为核心的WGCF可以正确合成具有复杂结构的真核蛋白,为小麦制粉副产物麦胚的深层次开发利用提供有效手段和研究方向.