柠檬酸杆菌属基质辅助激光解析电离飞行时间质谱图谱库的扩展及效果评价

摘要

目的 扩展基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)中柠檬酸杆菌属数据库.方法 采用PCR方法扩增并测序管家基因leuS进行系统发育分析鉴定菌种;采用平行对照实验优化菌株培养和样品制备条件;按照自建库方法手动采集优化培养后的菌株谱图,构建实验室内部数据库,并进行灵敏度与特异度评价.结果 经系统发育分析,有7个种共66株柠檬酸杆菌.最佳培养条件为哥伦比亚血平板做培养基、转种1次、培养24 h,甲酸溶液体积25μL.新增沃克曼氏柠檬酸杆菌和巴氏柠檬酸杆菌2个菌种谱图,补充中国株弗氏、布氏、吉氏、杨氏、无丙二酸柠檬酸杆菌等5个菌种本地区谱图.结论 leuS基因可以有效区分柠檬酸杆菌属菌种,MALDI-TOF图谱库的扩展提升了质谱对本地区柠檬酸杆菌属菌种鉴定准确性.