基于调控DNA序列变化的MphR(A)蛋白类ELISA系统性能提升研究

摘要

目的考察DNA序列对利用MphR(A)蛋白和启动子mph(A)序列的结合-解离特性构建的大环内酯类抗生素的体外类酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测系统性能的影响。方法通过MphR(A)蛋白与3段野生型DNA序列及其他突变序列构建类ELISA检测系统,先通过添加和不添加红霉素作用,获得各DNA所得的最大和最小OD_(450),以最大与最小OD_(450)值相差较大、最小OD_(450)值接近0作为表现较好的标准,再对表现较好的系统计算红霉素反应的半数抑制浓度(median inhibitory concentration,IC_(50))值。结果MphR(A)蛋白可以和不同DNA序列结合,从而获得不同的检测性能。采用突变序列AC4-DNA建立的类ELISA系统IC_(50)值为(2.33±0.70)ng/mL,低于野生型DNA所得的IC_(50)[(3.95±1.18)ng/mL],系统灵敏度提升。结论通过DNA调控该类ELISA系统是一种可行的手段。此外,在野生型A-DNA、B-DNA、C-DNA均发现一段22 bp伪回文结构,该伪回文结构符合Tet蛋白家族的DNA序列特征,认为是该伪回文结构是与蛋白结合的核心序列。