双重荧光数字PCR方法定量检测贝类中诺如病毒

摘要

目的建立双重荧光微滴式数字反转录聚合酶链式反应(microdrop digital reverse transcription polymerase chain reaction,RT-ddPCR)法定量检测贝类样品中诺如病毒。方法确定RT-ddPCR方法的最佳退火温度和探针浓度,建立贝类中诺如病毒双重荧光数字PCR检测方法,并定量检测秦皇岛2015~2017年7月采集的贝类样品中的诺如病毒。结果贝类中诺如病毒RT-ddPCR检测方法线性范围为5×10^4~5×10^0 copy/µL,检出限为1.0 copy/20µL的反应体系。用数字PCR方法检出秦皇岛贝类样品中诺如病毒总阳性率为67%,GⅠ型病毒平均浓度为8.70×10^2 copy/g消化腺,GⅡ型病毒平均浓度为1.04×10^3 copy/g消化腺。结论与荧光定量反转录聚合酶链式反应(fluorescence quantitative reverse transcription polymerase chain reaction,RT-qPCR)方法相比,数字PCR方法在检测贝类诺如病毒时有明显优势,能提高病毒检出率,不依赖标准品进行绝对定量。