抑制消减杂交技术在鲤鱼抗寒研究中的应用

摘要

用抑制性消减杂交技术(SSH)研究与鲤鱼(Cyprinus carpio)抗寒性状相关的基因.通过对荷包红鲤抗寒品系(Cyprinus carpio wuyanensis Tchang)和柏氏鲤(Cyprinus pellegnini Tchang)杂交F2代进行降温诱导实验,获得不同温度下的实验材料.利用抑制消减杂交技术构建了一个低温下差异表达基因的消减cDNA文库,共含有2000个克隆.对其中480个克隆进行斑点杂交筛选,共得到60个阳性克隆,选取其中29个克隆测序.通过序列分析比对,13个克隆与已知基因序列高度同源,同源性为85%～98%;另外的13个克隆为未知新基因序列.在13个同源性较高的克隆序列中,有brevican基因、AMP-acid连接酶、CFL2基因、催产素基因、主要组织兼容复合体(MHC)Ⅱβ链、锌指蛋白、细胞色素氧化酶、EPD-1基因、透明质酸结合蛋白多糖类、核受体/类视色素信号调节器等,其中9个基因上调表达,另有4个则抑制表达.这些基因的获得可为研究鱼类抗寒性状以及从分子水平上阐明其机制提供重要依据.