抑制消减杂交

摘要： [目的]应用抑制消减杂交(SSH)技术,建立灭多威胁迫下罗非鱼精巢SSH正反向文库.[方法]以雄性罗非鱼为试验动物,采用抑制性消减杂交技术构建罗非鱼精巢组织在灭多威胁迫下的正反向SSH文库.试验共获得45条EST,成功注释25条,其中正向文库13条,反向文库12条.功能明确基因按功能可分为5类,其中催化活性、细胞相关基因表达上调,细胞过程、结构分子活性相关基因表达下调.整合素β1表达量上调,丝/苏氨酸蛋白激酶pim-3、Ca2+-ATPase、Na+-K+-ATPase、核糖体蛋白L22表达下调.[结论]研究结果可为揭示灭多威对罗非鱼生殖毒性的分子机制奠定基础.

摘要： 长爪沙鼠具有脑血管变异缺失的特性,是脑缺血研究良好的模型动物.普通长爪沙鼠群体中模型成功率低,影响研究结果稳定性,不符合实验动物福利要求.我们团队在证实脑血管Willis环(circle of Willis,COW)变异缺失具有遗传性的基础上,首先通过定向选育建立了脑缺血高发群体,进而通过全同胞近亲繁殖的方式,建立了脑缺血模型近交系,其COW缺失率达76.62％,模型成功率达到88.89％.此外,建立了近交系微卫星DNA和生化位点遗传检测方法,分析了长爪沙鼠脑缺血模型近交系动物的生长发育和血液生理生化等指标,为该模型的推广应用奠定了基础.我们还发现,VEGFA基因、AKT/PI3K和Notch信号通路在长爪沙鼠脑血管发育中发挥重要作用.通过抑制消减杂交方法筛选获得4个与长爪沙鼠脑血管发育相关的基因.长爪沙鼠脑缺血模型近交系的培育成功解决了模型发生率低的问题,减少了动物使用量,提高了研究结果可信度和稳定性,促进了相关机制研究.

摘要： 为获得紫茎泽兰处理鸡柔嫩艾美耳球虫后差异基因,将0.5％紫茎泽兰提取液作用于鸡柔嫩艾美耳球虫卵囊孢子化过程,采用抑制消减杂交技术(SSH)筛选处理后卵囊的差异表达基因,通过GO和COG功能预测分析,并采用实时荧光定量PCR验证差异表达的基因.结果显示,采用SSH成功构建了紫茎泽兰处理前后鸡柔嫩艾美耳球虫卵囊的cDNA消减文库,获得86条ESTs序列,经拼接和聚类后得到31条独立基因(Unigenes),其中有23个基因有功能注释,8个基因没有功能注释,另外有4个基因没有同源性匹配.为进一步验证文库的特异性,从中随机选取3个差异表达基因,运用实时荧光定量PCR技术验证表面抗原13、3-羟酰辅酶A脱氢酶和细胞色素P450基因在紫茎泽兰处理前后的表达差异,结果显示,3个基因在经紫茎泽兰处理的鸡球虫孢子化卵囊中的表达量明显低于未处理组,说明紫茎泽兰对柔嫩艾美耳球虫卵囊具有一定的活性抑制作用.本试验获取了紫茎泽兰作用柔嫩艾美耳球虫卵囊的主要调控基因,为将紫茎泽兰研发成环境杀虫剂奠定了良好的理论基础,也可为球虫致弱疫苗或基因缺失疫苗的靶标筛选研究提供参考.

摘要： Potato virus accumulation is one of the important reasons for the decline of yield and quality in potato production.In order to screen and clone the potato virus induced response gene,we constructed a suppression subtractive hybridization (SSH) library using cDNAs from potato virus disease carrying plant leaf as the tester,and those cDNAs from a virus-free seedling leaf as the driver.To verify the effect of library,98 randomly selected positive clones were identified by PCR from the library and sequenced,and 45 high quality non repeat sequences were obtained.By blast analysis in GenBank,we found that 14 of them were sequences belonging to the potato virus gene,22 of them had high homology with known genes,and 9 of them had no homologous reference gene.Two frequently found ESTs in the library were analyzed using quantitative real time PCR,and their expression was induced by potato virus.The results therefore showed that the SSH library was constructed successfully.This work has thus laid a foundation for further screening for potato virus related pathogenicity,and induction of corresponding defense response genes.This may lead to analysis of the molecular mechanisms of interaction between the potato plant and the virus,and use of biotechnology to cultivate virus resistant potato varieties.%马铃薯病毒积累引起的种薯退化是马铃薯生产中造成产量和品质下降的重要原因之一.本研究以马铃薯病毒病携带植株叶片cDNA为试验组(Tester)、脱毒种苗叶片eDNA为驱动组(Driver),采用抑制消减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH)技术构建了马铃薯病毒诱导应答基因的cDNA文库;为验证文库构建效果,从文库中随机挑取了98个阳性克隆经PCR验证后测序,获得了45条高质量的有效非重复序列;经与GenBank进行同源比对后发现,其中14条非重复序列属于马铃薯病毒基因序列,22条与已知基因序列同源性较高,9条无同源参考基因;选取文库中出现频率较高的2个ESTs(expressed sequence tag,表达序列标签)用qRT-PCR技术分析发现,其表达量受马铃薯病毒侵染的诱导.结果表明,该SSH文库构建较为成功,为进一步筛选与马铃薯病毒致病、防御相关的应答基因,解析马铃薯与病毒互作的分子机理,利用生物技术手段培育抗病毒马铃薯奠定了基础.

摘要： Purpose To investigate the role of CHMP4A and TSPYL-2 in early pathogenesis of esophageal cancer.Methods Through comparison of the four subtractive libraries,early esophageal squamous cell carcinoma genes CHMP4A and TSPYL-2 were chosen for further study.Through RT-PCR and immunohistochemistry methods,CHMP4A and TSPYL-2's expression was detected in esophageal squamous cell carcinoma tissue,cancerous tissue and normal esophageal mucosa.Results CHMP4A and TSPYL-2 expression between esophageal squamous cell carcinoma and normal esophageal epithelium tissue had significant differences (P ＜ 0.05),and the CHMP4A gene expression in esophageal mucosa,field cancerization areas,esophageal squamous cell carcinoma tissue increased,while TSPYL-2 gene expression in esophageal mucosa,field cancerization areas,esophageal squamous cell carcinoma tissue decreased,which were consistent with the protein expression of CHMP4A and TSPYL-2.Conclusion CHMP4A and TSPYL-2 genes are differentially expressed in esophageal squamous cell carcinoma,which can be used as alternative genetic markers for further research.%目的 探讨染色质重塑蛋白4A(CHMP4A)及睾丸特定蛋白-2(TSPYL-2)基因在食管癌早期癌变中的作用.方法 采用RT-PCR、免疫组化法从RNA及蛋白水平检测CHMP4A及TSPYL-2在食管鳞状细胞癌组织、癌化区域组织及正常食管黏膜组织中的表达.结果 CHMP4A及TSPYL-2基因在食管鳞状细胞癌组织和正常食管黏膜组织中的表达差异有统计学意义(P＜0.05),在癌化区域组织和正常食管黏膜组织中的表达差异有统计学意义(P＜0.05),且CHMP4A在正常食管黏膜、癌化区域组织、食管鳞状细胞癌组织中的表达依次增高,TSPYL-2基因在正常食管黏膜、癌化区域组织、食管鳞状细胞癌组织中的表达依次降低,CHMP4A及TSPYL-2蛋白表达的变化趋势与CHMP4A及TSPYL-2基因一致.结论 差异表达基因CHMP4A及TSPYL-2可作为食管鳞状细胞癌早期基因备选基因进行后续实验.

摘要： 东方百合与卷瓣组野生百合杂交(简称OS组合),属于亲缘关系最远的组间杂交,杂交障碍最大。挖掘雌蕊中杂交亲和性与不亲和性差异表达基因,有可能解释不亲和性杂交中引起花粉管定向生长异常的机理,进而阐明不亲和性杂交的分子机理,为实施克服杂交不亲和障碍技术措施提供依据。本研究采用抑制消减杂交技术(SSH技术),分别以不亲和性杂交和亲和性杂交的东方百合雌蕊为试验组(tester)和驱动组(driver),建立正向抑制消减杂交文库,随机挑选180个阳性克隆,经过测序、去劣、去冗余、序列比对,有113个EST与数据库中的已知序列具有同源性,最终获得10个差异表达基因。采用RT-PCR技术对10个差异表达基因进行验证,其中有1个基因在不亲和性杂交的雌蕊中表达上调、7个基因表达下调、2个基因无明显变化。对差异表达基因进行功能注释及分类,差异表达基因主要集中于信号转导(包括丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶PP2A-3、钙依赖蛋白激酶CDPK、小G结合蛋白)、抗逆防御(包括分子伴侣(clp B)、过氧化氢酶CAT2)、转运(包括质膜ATPase、焦磷酸酶质子泵)、蛋白命运(包括60S核糖体蛋白)等功能类别。据此推测,在东方百合×山丹组(系)间不亲合性杂交育种过程中,可能引起雌蕊与花粉管信号交流异常、物质转运能力减弱和雌蕊耐受逆境能力降低,从而导致杂交不亲和性。

摘要： 重金属包括镉和铅等污染严重威胁人类健康.为从基因水平研究鱼类应答重金属胁迫的分子机理,本研究利用抑制消减杂交技术构建稀有(鮈)鲫Gobiocypris rarus对镉处理反应的正、反向抑制消减文库.文库质量检测表明消减效率达210倍,通过对正、反向文库中部分表达序列标签进行序列测定,获得9条表达丰度较高的表达序列标签,平均长度为438 bp.利用快速扩增cDNA末端技术克隆获得核糖体蛋白s18(Rps18)基因的完整编码区,序列长度为525 bp,其中编码区459 bp,编码152个氨基酸,3'非翻译区38 bp,5'非翻译区28 bp.并利用实时荧光定量技术对Rps18基因在铅胁迫下的表达谱进行了研究,结果表明稀有(鮈)鲫肝组织中Rps18基因的表达量变化较明显.

摘要： Z. jujube shows some special characters of flowering and fruit bearing. In order to obtain genes involved in blossom development, two suppression subtractive cDNA libraries were constructed using developing blossoms of‘Jinsi No.4’ as tester and leaves as driver. The recombination rates of the SSH libraries from Z. jujube’s flowers and leaves were 92.05% and 90.26%, with the length of inserted fragments ranged from 200 to 2 000 bp, and mainly focusing on 1 000 bp. A total of 1 000 positive clones were randomly selected from the SSH libraries ofZ. jujube’s flowers and leaves respectively for DNA sequencing and assembled. Consequently, 43 contigs, 53 singletons, 73 ORFs, 96 unigenes and 20 annotated sequences were obtained from SSH library ofZ. jujube’s flowers. Forty-ifve contigs, 41 singletons, 70 ORFs, 86 unigenes and 23 annotated sequences were obtained from SSH library ofZ. jujube’s leaves, and the annotated sequences could be divided into six groups.%枣树具有独特的开花结果特性，为获得枣花发育基因，以金丝4号枣不同发育时期的花蕾和同时期的叶片cDNA互为试验方和驱动方，利用抑制消减杂交技术分别构建了枣花和枣叶抑制消减杂交cDNA文库（SSH文库）。枣花和枣叶SSH文库重组率分别是92.05%和90.26%，插入片段长度均介于200～2000 bp之间，主要集中于1000 bp左右。分别从枣花和枣叶SSH文库中随机挑选1000个阳性克隆进行DNA测序、组装拼接，结果显示枣花SSH文库中获得96条unigene，其中contigs 43个，singletons 53个，96条unigene预测得到73个ORF，经过同源比对分析获得有注释的序列20条，按功能分为7类；枣叶SSH文库中获得86条unigene，其中contigs 45个，singletons 41个，86条unigene预测得到70个ORF，经过同源比对分析获得有23条注释的序列，按功能分为6类。

摘要： 寒富苹果是沈阳农业大学育成的二倍体、抗寒大苹果品种,通过秋水仙素诱导获得寒富苹果同源四倍体在田间表现明显矮化等特性.为了探寻苹果同源四倍化后表型差异的分子机理,采用抑制消减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH)技术,分别建立寒富四倍体上调和下调表达cDNA文库.分别从这两个cDNA文库中各随机挑取200个阳性克隆测序,发现其中有211条序列与已知植物基因同源性大于80％,定量RT-PCR验证了部分uniESTs的表达趋势和表达水平.初步筛选获得了与植株矮化相关的BKI1和DWF4基因,与植物光合特性相关的光系统Ⅱ中的关键基因PsbZ;发现了四倍体中表达显著上调的Chitinase基因,推测四倍体可能在真菌病害的胁迫中表现更为优良的抗性.本研究为探究同源多倍体差异表型的分子机理奠定基础.

摘要： 从候选基因角度研究仔猪ETEC K88ab/ac受体基因是一个重要思路。本研究以全同胞仔猪为研究对象，在分析其小肠粘膜粘附ETEC K88粘附表型的基础上，利用抑制消减杂交技术，构建仔猪小肠粘膜细胞表达基因的正反消减cDNA文库，通过差异筛选、测序、BLAST分析，直接分离仔猪ETEC K88抗性候选基因。本研究项目的开展将为猪肠毒素大肠杆菌K88抗性基因的研究提供一个“候选基因平台”，为这个基因的最终克隆奠定坚实的物质基础。

摘要： 抑制消减杂交(SSH)是以消减杂交为基础结合抑制PCR方法发展起来的分离克隆差异基因的一种策略。该方法具有简便易行、特异性高、背景低、重复性好、能分离出丰度较低的特异性片段等特点。本文就SSH的主要原理、基本过程、技术要点、特点以其在细菌基因组差异比较研究中的应用现状作一简要的综述。

摘要： 在生物个体发育的不同阶段或不同组织细胞中发生的不同基因按时间、空间有序表达的方式称为基因的差异表达。生物的发育、疾病、死亡都与基因的差异表达有关。随着后基因组的到来，生物重要经济性状或疾病的分子基础研究已不再局限于单个基因的功能分析，而是需要找到控制某个性状或疾病的整个基因网络并研究这一基因网络是如何协同工作的。于是差异表达基因筛选技术应运而生，它们是转录水平上筛选生物重要经济性状或疾病相关基因的重要工具，本文指出大致包括差异显示技术、cDNA代表性差异分析技术、抑制消减杂交技术、基因表达系列分析技术等。

摘要： 脑垂体作为机体最重要的内分泌腺参与机体一系列生命活动的调节，研究表明它分泌的多种激素对生物体的生长和繁殖性能具有重要调节作用。本研究采用抑制消减杂交技术构建鸭开产前后脑垂体消减cDNA文库，期望从中筛选出与鸭产蛋性能相关基因，为探索借助标记辅助等技术提高鸭的产蛋性能提供理论依据。

摘要： Smarcel(swi/snf related gene)是从本实验室利用抑制消减杂交技术构建的雌雄鸡胚性腺组织差异表达cDNA文库中筛选出的一个差异表达基因。本研究利用整体原位杂交方法(WISH)确定其表达的主要部位，进一步研究该基因在鸡胚中的时空表达谱，验证其在不同性别鸡胚中的差异表达特征。

摘要： 前脂肪细胞(Preadipocytes)是脂肪细胞的一种，由多能干细胞或胚胎干细胞分化而来，胞浆内不含脂滴但具有聚脂的潜力，经诱导后能在胞浆内聚积脂滴而分化为成熟的脂肪细胞。目前，对前脂肪细胞诱导分化过程中相关基因表达规律的研究大多集中在PPARs和C/EBPs两个基因家族上，为进一步拓展筛选与前脂肪细胞分化相关基因，本研究利用Clontech公司的PCR-SelectTM cDNA Subtraction Kit构建猪前脂肪细胞诱导分化前、后正反向抑制消减cDNA文库，继而筛选前脂肪细胞诱导分化前、后的差异表达基因，为研究动物脂肪沉积、肥胖等提供新的候选研究基因。

摘要： 为阐明乙型肝炎病毒携带者(ASCs)，形成机制，本文采用抑制消减杂交(SSH)技术构建差异表达基因cDNA文库，筛选出差异表达基因穿孔素1(perforin 1)，并在相应的两组病人中用实时定量RT—PCR证实了perforin 1在mRNA水平的差异表达。

摘要： 阉牛与公牛相比,生长速度减缓,体脂累积加速,肌内脂肪和内的嫩度增加.分离阉牛和公牛肌肉组织差异表达基因,可为弄清这些差异的机理提供基本信息.本研究利用抑制消减杂交技术(suppression subtractive hybridization,SSH)成功地构建了阉牛和公牛背最长肌间的消减cDNA文库,通过PCR和反Northern筛选,获得了84个差异表达克隆,发现共代表10个ESTs,在牛中均为已知基因.对文库中所包含的肌动蛋白2基因(ACTG2)、原肌球蛋白2基因(TPM2)、胰岛样生长因子1基因(IGF-1)进行了实时荧光定量PCR检测,结果显示:ACTG2、TPM2、IGF-1基因在阉牛背最长肌组织RNA池中的表达量,分别为对照的公牛背长肌RNA池中表达量的1．96、2．41、2．89倍,这提示我们,上述基因的上调表达很可能与阉牛肉质特性的形成有密切的关系,可以作为研究该性状的候选基因.

摘要： 为了从基因表达水平研究沟叶结缕草高温耐热性的分子机制,利用SSH方法构建了沟叶结缕草对高温(40°C)处理响应的正向差减文库。通过reverse northern杂交方法筛选文库,挑选出高温胁迫处理下35个差异表达基因,对这些基因进行测序,并将测序获得的结果与基因组数据库(NCBI)进行比对,获得了26个基因功能已知的差异表达的基因。这些已知基因分别参与信号转导、植物代谢、植物抗逆性反应、基因表达调控和蛋白质的合成等过程。

摘要： 为了从基因表达水平研究沟叶结缕草高温耐热性的分子机制,利用SSH方法构建了沟叶结缕草对高温(40°C)处理响应的正向差减文库。通过reverse northern杂交方法筛选文库,挑选出高温胁迫处理下35个差异表达基因,对这些基因进行测序,并将测序获得的结果与基因组数据库(NCBI)进行比对,获得了26个基因功能已知的差异表达的基因。这些已知基因分别参与信号转导、植物代谢、植物抗逆性反应、基因表达调控和蛋白质的合成等过程。

摘要： 本发明公开了一种杂交水稻穗萌抑制剂及其制备方法和抑制杂交水稻穗萌的方法，该杂交水稻穗萌抑制剂以水为溶剂，含有浓度为20～60mg/kg的脱落酸、40～160mM的环己胺、10～60mg/kg丁香酚。本发明使用脱落酸、环己胺和丁香酚进行组合，不但有效地降低了杂交水稻穂萌率，而且对收获后的水稻种子芽、根生长以及干重有极显著的促进作用，综合品质有所提升。

摘要： 本发明提供了一种双链特异性DNA酶介导的cDNA均一化消减杂交方法，依次包括第一链cDNA的合成、合成双链cDNA、转录RNA、逆转录、均一化和消减杂交、双链特异性DNA酶消化、PCR扩增、克隆差异表达基因及鉴定等步骤。与其它方法相比本发明的有益效果主要体现在：(a)对共同表达基因的高消减效率，对差异表达基因的高效富集，同时表达量很低的差异表达基因可以被有效富集；(b)能够得到全长cDNA序列。

摘要： 本发明提供了一种全长cDNA均一化消减杂交方法，所述方法包括以下顺序步骤：(1)第一链cDNA的合成；(2)双链cDNA的合成；(3)选择性连接和引物延伸；(4)消减杂交；(5)PCR扩增差异表达的cDNA。消减杂交的PCR产物可以直接克隆到载体上，构建差异表达基因富集的cDNA文库，利用这些文库分析基因表达，也可以制备基因芯片，还可以标记为探针，从已有文库中筛选差异表达的基因。此外如果消减效率不够高，还可以把消减杂交的PCR产物重复进行消减杂交，提高均一化和消减效率。本发明所述的全长cDNA均一化消减杂交(FNSH)方法的有益效果主要体现在：对差异基因的高消减效率，对差异表达基因的高效富集，高效均一化，并且得到全长cDNA。

摘要： 本发明公开了一种消减杂交文库构建方法，该方法包括以下步骤：(1)消减杂交装置的制备；(2)检测组和驱动组的酶切；(3)驱动组的固定；(4)检测组连接接头；(5)进行消减杂交；(6)消减产物的分组扩增；(7)消减杂交文库的构建。与传统的物理消减杂交方法相比，本发明具有以下优点：1)消减杂交装置成本低，制作简单；2)尼龙膜与核酸分子以共价键结合，结合牢固；3)在杂交过程中可控制杂交温度和时间；4)可根据需要控制杂交轮次；5)洗脱体积可按需要控制在数十微升，便于进一步的操作；6)试验操作简单，可重复性好；7)在消减杂交后进行PCR，避免了假阳性的出现；8)消减后进行分组PCR，可使低丰度的差异表达cDNA扩增。

摘要： 本发明公开了一种杂交水稻穗萌抑制剂及其制备方法和抑制杂交水稻穗萌的方法，该杂交水稻穗萌抑制剂以水为溶剂，含有浓度为20～60mg/kg的脱落酸、40～160mM的环己胺、10～60mg/kg丁香酚。本发明使用脱落酸、环己胺和丁香酚进行组合，不但有效地降低了杂交水稻穂萌率，而且对收获后的水稻种子芽、根生长以及干重有极显著的促进作用，综合品质有所提升。

摘要： 本发明公开了一种DSN法直接获得差异表达基因全长cDNA的改良消减杂交方法，属于基因工程领域，其主要方法是：利用Cap-finder法来合成双链cDNA，实验组和对照组分别进行反转录，实验组用3′poly A尾和5′-GGG帽结构分别在cDNA两端加上序列相同的锚定引物，对照组用普通反转录方法反转录，反转录后的cDNA与实验组的cDNA进行杂交，杂交结束后加入DSN酶进行消化，再进行纯化即获得实验组的差异表达cDNA，利用锚定引物进行PCR扩增，扩增产物分级分离后收集大片段连接T载体，进行转化获得阳性克隆，然后进行斑点杂交，本发明能够一次获取全长差异cDNA。

摘要： 本发明提供了一种双链特异性DNA酶介导的cDNA均一化消减杂交方法，依次包括第一链cDNA的合成、合成双链cDNA、转录RNA、逆转录、均一化和消减杂交、双链特异性DNA酶消化、PCR扩增、克隆差异表达基因及鉴定等步骤。与其它方法相比本发明的有益效果主要体现在：(a)对共同表达基因的高消减效率，对差异表达基因的高效富集，同时表达量很低的差异表达基因可以被有效富集；(b)能够得到全长cDNA序列。

摘要： 本发明提供了一种全长cDNA均一化消减杂交方法，所述方法包括以下顺序步骤：(1)第一链cDNA的合成；(2)双链cDNA的合成；(3)选择性连接和引物延伸；(4)消减杂交；(5)PCR扩增差异表达的cDNA。消减杂交的PCR产物可以直接克隆到载体上，构建差异表达基因富集的cDNA文库，利用这些文库分析基因表达，也可以制备基因芯片，还可以标记为探针，从已有文库中筛选差异表达的基因。此外如果消减效率不够高，还可以把消减杂交的PCR产物重复进行消减杂交，提高均一化和消减效率。本发明所述的全长cDNA均一化消减杂交(FNSH)方法的有益效果主要体现在：对差异基因的高消减效率，对差异表达基因的高效富集，高效均一化，并且得到全长cDNA。

摘要： 本发明涉及蛋白表达差异的分析方法，特别是直接在蛋白质水平上分析蛋白表达差异的方法。本发明通过构建DNA或RNA随机序列库（aptamer库），使之进入细胞体内结合相应特异性抗原蛋白分子。如果某蛋白分子有表达数量差异，那么其结合的特异性DNA、RNA序列或aptamer也会表现出相应的数量变化来，从而把在蛋白水平上的消减杂交转移到对DNA序列的消减杂交上来。从而达到了简捷快速的高通量筛选表达差异蛋白的目的。

摘要： 本发明公开了一种消减杂交文库构建方法，该方法包括以下步骤：(1)消减杂交装置的制备；(2)检测组和驱动组的酶切；(3)驱动组的固定；(4)检测组连接接头；(5)进行消减杂交；(6)消减产物的分组扩增；(7)消减杂交文库的构建。与传统的物理消减杂交方法相比，本发明具有以下优点：1)消减杂交装置成本低，制作简单；2)尼龙膜与核酸分子以共价键结合，结合牢固；3)在杂交过程中可控制杂交温度和时间；4)可根据需要控制杂交轮次；5)洗脱体积可按需要控制在数十微升，便于进一步的操作；6)试验操作简单，可重复性好；7)在消减杂交后进行PCR，避免了假阳性的出现；8)消减后进行分组PCR，可使低丰度的差异表达cDNA扩增。