漠斑牙鲆胚胎细胞系的建立与鉴定

摘要

漠斑牙鲆(Paralichthys lethostigma)是中国近年新开发的重要海水养殖鱼类,本研究以漠斑牙鲆囊胚期胚胎为材料,探索了鱼类胚胎细胞分离和培养的条件,建立了漠斑牙鲆胚胎细胞培养技术.建立的漠斑牙鲆胚胎细胞系(SFEC)至今已经培养了240多天,传至80多代.SFEC的完全培养基采用添加抗生素、胎牛血清(FBS)、花鲈血清(SPS)、成纤维生长因子(bFGF)的DMEM.SFEC形态小而呈圆形、多边形,在培养基中生长迅速.本实验检测了温度、胎牛血清浓度、成纤维生长因子对SFEC生长的影响.在24～30℃之间SFEC生长良好,但当温度低于18℃时细胞生长速度明显减慢.在含15% FBS的培养基中,SFEC生长速度明显比在含7.5% FBS的培养基中快,在培养基中添加bFGF可以使细胞生长速度显著提高.SFEC的二倍体核型为2n=6st+42t.将GFP报告基因通过脂质体介导的方法转入SFEC中并成功地获得了表达,转化率为20%.