拟穴青蟹泛素基因的克隆及其在性腺发育过程中的表达

摘要

在实验室所构建的拟穴青蟹(Scylla paramamosain)EST 文库基础上筛选出泛素基因(Ubquitin, Sp-Ub)片段,利用RACE技术克隆其全长cDNA序列,并对其结构进行分析；利用实时定量PCR技术检测该基因在雌蟹各组织及性腺不同发育阶段中的表达情况.结果显示, Sp-Ub基因全长555 bp,编码154个氨基酸,其第1~76个氨基酸为高度保守的泛素结构域,第101~147的氨基酸残基为典型的核糖体蛋白S27a的保守区域；预测的泛素结构域二级结构由5个延伸链,1个α-螺旋及其连接的无规卷曲构成, Sp−Ub三维结构由1个α-螺旋以及5个β片层.多重比对表明不同物种的泛素结构域和核糖体蛋白S27a结构域在进化过程中高度保守.定量PCR结果显示, Sp-Ub在鳃中的表达水平最高,卵巢次之,各组织间的表达无显著性差异,说明Sp-Ub基因在各组织中的表达恒定,且具有普遍作用；在卵巢发育过程中, Sp-Ub在O5期的表达水平最高, O1、O4期次之, O2期表达量最低且与O5期具有显著差异(P<0.05)；在精巢发育过程中, Sp-Ub在T2期的表达量最高,其次为T1期, T3期表达最低且与T2期具有显著差异(P<0.05).本研究结果说明了 Sp-Ub 对拟穴青蟹生殖细胞的生长和发育可能具有重要作用.本研究将为甲壳动物性腺发育调控的分子机制奠定基础.%10.3724/SP.J.1118.2012.00946