斜带石斑白细胞cDNA文库的构建

摘要

用Tripure试剂盒提取斜带石斑白细胞总RNA,反转录合成第一链cDNA,进行长距离PCR,蛋白酶K消化,Sfi I酶切,通过CHROMASPIN-400柱,回收大于500bp的cDNA,与λTripIEx2载体连接,体外包装后构建了斜带石斑白细胞的cDNA文库.库容1.65×1.06,重组频率82%,扩增后滴度7.5×109pfu·mL-1.插入片断长度500～2300bp,最多的是在750～1000bp范围.本文库可作为筛选斜带石斑细胞因子基因的重要资源.