筛选用转座子Tn916诱变的具有免疫原性的嗜水气单胞菌蛋白酶缺失株

摘要

以携带质粒pAM120(Apr、Tcr/Tn916)的大肠杆菌CG120株为供体菌，与受体菌嗜水气单胞菌J-1株，采用滤膜接合法进行接合转移，在选择平板(含Tc、cfz和脱脂奶)上进行筛选，筛选出6株蛋白酶缺失株(ECPase-)，ECPase-菌株其生长速度，对正常鲫血清的抗性降低，用脱脂奶平板法及底物法检测，蛋白酶产量明显降低。与亲本J-1株相比，突变株致病力降低，对鲫的半数致死量大于108(J-1株对鲫的半数致死量为5×103)。用ECPase-突变株MJ-1株的18h培养物(5×106CFU)接种健康鲫，不产生亲本J-1株引起的病变及死亡。用MJ-I活菌免疫鲫，在第5周产生较高的凝集抗体，且对强毒株J-1的攻击有保护作用。表明蛋白酶是嗜水气单胞菌的一个重要的毒力因子，ECPase-突变株仍具有免疫原性。