斜带石斑鱼生长激素cDNA克隆及其在大肠杆菌中的融合表达

摘要

通过构建斜带石斑鱼垂体cDNA文库,克隆了其生长激素(GH)全长cDNA.斜带石斑鱼GH全长cDNA为955bp,编码的多肽为204 aa.应用PCR方法把编码GH成熟肽的cDNA片段克隆到表达载体pET-15b,在大肠杆菌BL21(DE3)表达N端含6个组氨酸的融合多肽.SDS-PAGE结果表明,0.4 mmol@L-1IPTG诱导表达的蛋白约为24 kDa,主要为不溶性的包含体.细菌裂解液沉淀溶于6 mol@L-1盐酸胍后,用Ni2+-NTA树脂进行亲和分离纯化,纯化产物在SDS-PAGE上表现为一条24 kDa的蛋白带.在黑鲷GH放射免疫分析系统中,纯化产物能与黑鲷GH竞争结合GH抗体,表明大肠杆菌表达的斜带石斑鱼GH融合多肽具有GH免疫活性.